文献类型： 中文期刊
作者： 谢华 1 ; 陈绪清 1 ; 朱朗 2 ; 贾云鹤 3 ; 姚磊 1 ; 崔崇士 3 ; 马荣才 1 ;
作者机构： 1.北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心
2.中国农业大学生物学院
3.东北农业大学园艺学院
关键词： 大白菜;BcLRR;cDNA克隆;遗传转化;软腐欧文氏菌抗性
期刊名称： 农业生物技术学报
ISSN： 1674-7968
年卷期： 2010 年 18 卷 03 期
页码： 14-21
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 利用前期构建的软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora)菌株BC1侵染诱导表达的大白菜(Brassica campestrissubsp.pekinensis)SSHcDNA文库和cDNA芯片。在芯片分析的基础上,选取一个与拟南芥(Arabidopsis thaliana)类富含亮氨酸重复(LRR)抗病蛋白Cf-5高度同源的EST序列(GenBank登录号:DN962361)进行进一步分析。用5'-和3'-RACE方法克隆了该基因全长1286bp的cDNA序列,包含一个完整ORF和3'UTR,并具有Poly(A)加尾信号,将其命名为BcLRR基因(GenBank登录号:EU424347)。BcLRR推导蛋白序列由327个氨基酸组成,除N端跨膜螺旋结构域外,大部分为LRR结构域,包含8个胞外LRR重复单元,由7个规范的LXXLXLXN结构和1个不规范LXXLXXXN组成。氨基酸序列比对分析发现,BcLRR蛋白与拟南芥类LRR抗病蛋白Cf-5同源性高达96.6%,与棉花(Gossypium hirsutumL.)类LRR抗病蛋白GhLRR同源性为82.3%,它们之间大部分变异限定在N端信号肽区。系统发育关系表明,在三种植物中功能均未知的这一蛋白属于一个新的胞外LRR蛋白类型,在结构上不同于其它抗性已知的胞外型LRR蛋白。将受CaMV35S启动子驱动的BcLRR基因完整ORF序列转化拟南芥Col-0,PCR鉴定、Southern杂交和RT-PCR分析表明,BcLRR基因已整合到拟南芥基因组中,并在拟南芥中获得了转录。软腐病病情指数分析表明,转BcLRR植株提高了对软腐欧文氏菌的抗性。
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