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地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因的克隆、烟草瞬时表达及转化拟南芥的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 李潇 1 ; 孙海彦 1 ; 阮孟斌 2 ; 王霈虹 3 ; 彭明 2 ;

作者机构： 1.海南大学

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

3.北京市科学技术情报研究所

关键词： 地衣芽孢杆菌;耐高温α-淀粉酶基因;烟草瞬时表达;拟南芥

期刊名称： 植物学报

ISSN： 1674-3466

年卷期： 2015 年 50 卷 03 期

页码： 354-362

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)中克隆到耐高温α-淀粉酶基因全长,构建了原核表达载体,转入大肠杆菌(Escherichia coli)中,使用IPTG于28℃诱导6小时后,通过SDS-PAGE检测到目的蛋白,分子量约为55 kDa,并通过酶活力检测实验证明该蛋白具有耐高温α-淀粉酶活性。同时构建了该基因融合GFP的植物表达载体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导瞬时转化烟草(Nicotiana tabacun)下表皮细胞并在荧光显微镜下观察,发现在烟草下表皮细胞的细胞质和液泡中均有绿色荧光。使用I_2-KI溶液对乙醇脱色后的烟草叶片进行染色,显色反应表明在烟草中表达的耐高温α-淀粉酶具有酶活性。最后,采用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥(Arabidopsis thaliana)中,筛选到稳定遗传的耐高温α-淀粉酶基因的拟南芥纯合子。研究结果为后期开展表达耐高温α-淀粉酶的转基因植物的相关研究奠定了实验基础。

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