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巴西橡胶树胶乳均一化酵母双杂交cDNA文库构建

文献类型： 中文期刊

作者： 余海洋; 张宇; 王萌; 覃碧;

关键词： 巴西橡胶树;胶乳;酵母双杂交cDNA文库;均一化

期刊名称： 植物生理学报

ISSN： 2095-1108

年卷期： 2016 年 03 期

页码： 312-316

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以巴西橡胶树无性系‘热研7-33-97’胶乳为材料,采用SMART~cDNA合成技术反转录合成cDNA第一链,并通过LDPCR合成双链cDNA(ds-cDNA),采用双链特异性核酸酶(DSN)对ds-cDNA进行均一化处理,并经过CHROMA SPIN+TE-400柱子去除短片段的cDNA,纯化后的cDNA和线性化载体p GADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞构建均一化酵母双杂交cDNA文库。结果显示:均一化之前橡胶树胶乳cDNA片段分布较广,丰度分布不均匀,经DSN均一化处理和CHROMA SPIN+TE-400柱纯化后,小于500 bp的片段得到有效去除,高丰度cDNA明显下降,而且RT-PCR扩增结果显示,均一化处理后,18S rRNA和β-actin两个管家基因的表达丰度均明显降低。最终获得初始文库的独立克隆为1.26×10~6 cfu,文库滴度达到3.23×107 cfu·mL~(-1),重组率为87%,平均插入片段大于1.0 kb。本研究构建了一个橡胶树胶乳均一化酵母双杂交cDNA文库,为进一步研究天然橡胶生物合成途径及其调控的分子机制提供借鉴。

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[2]橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库的构建与EST测序分析. 曾日中,段翠芳,聂智毅,代龙军,黎瑜. 2011

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