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稻瘟病菌3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)的快速克隆(英文)

文献类型： 中文期刊

作者： 鲁国东 1 ; 王宗华 2 ; 谢联辉 2 ; 郑学勤 2 ;

作者机构： 1.福建农业大学植保系

2.福建农业大学植保系,中国热带农业科学院热带生物技术国家重点实验室

关键词： 稻瘟病菌；3-磷酸甘油醛脱氢酶基因（gpd）；克隆方法

期刊名称： 浙江农业大学学报

ISSN： 1008-9209

年卷期： 1998 年 05 期

页码：

收录情况： 北大核心

摘要： 本文描述了一种简便而有效的克隆基因未知５＇和３＇末端序列的方法，并用此方法克隆了稻瘟病菌的３－磷酸甘油醛脱氢酶基因（ｇｐｄ）．即通过比较１２种真菌的已知ｇｐｄ基因序列，寻找内部的保守区段，设计并合成一对特异性引物．引物Ｐ１为靠近基因５＇端的一个特异性序列，引物Ｐ２则与３＇端的一段特异性序列互补．以双链ｃＤＮＡ－ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ载体连接物为模板，利用基因的特异性引物Ｐ１和载体上的标准测序引物Ｔ７，ＰＣＲ扩增出包含ｃＤＮＡ３＇末端的序列；利用特异性引物Ｐ２和标准测序引物Ｔ３，扩增出包含ｃＤＮＡ５＇末端的序列．将两片段分别克隆、测序和合并后，得到全长１０１１ｂｐ的稻瘟病菌３－磷酸甘油醛脱氢酶基因（ｇｐｄ）的编码区序列．该序列及其相应的氨基酸序列与已知真菌的ｇｐｄ基因序列有着６１．４％－８６．６％和６４．６％－８６．３％的同源性．特别在酶的活性功能区不同真菌间有着近乎相同的氨基酸序列．

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