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甘蓝花蕾酵母双杂交cDNA文库构建及评价

文献类型： 中文期刊

作者： 胡轼林 1 ; 雷蕾 1 ; 王效维 2 ; 颉建明 1 ; 康俊根 2 ;

作者机构： 1.甘肃农业大学园艺学院

2.北京市农林科学院蔬菜研究中心

关键词： 甘蓝;SMART技术;酵母双杂交;cDNA文库

期刊名称： 西北农业学报

ISSN： 1004-1389

年卷期： 2015 年 24 卷 08 期

页码： 145-152

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了探索甘蓝胞质雄性不育的分子机制并研究花药发育相关重要基因编码蛋白质间的相互作用,采用SMART技术与同源重组方法,在酵母菌株Y187中构建了甘蓝花蕾酵母双杂交cDNA文库。以甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)Ogura细胞质雄性可育保持系‘463’为试验材料,混合其不同生长时期的花蕾,提取总RNA,利用SMART技术合成双链cDNA,产物经CHROMA SPINTM+TE-400柱纯化后,与线性载体质粒pGADT7-Rec共转化入感受态酵母菌Y187中,二者利用酵母细胞内较高的同源重组酶活性,在酵母体内进行同源重组产生有复制活性的环形文库质粒,然后在缺亮氨酸(LEU)培养基板上筛选出所有克隆,成功构建了甘蓝花蕾酵母双杂交cDNA文库。经检测,cDNA文库的转化率为1.20×108转化子/3μg pGADT7-Rec,文库滴度为1.85×109 pfu/mL,重组率大于95%。该文库容量为4.5×106cfu,理论上包含了甘蓝花蕾发育相关的所有基因。

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