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人工合成靶序列快速构建多靶标RNAi表达载体

文献类型： 中文期刊

作者： 张秀春 1 ; 吴坤鑫 1 ; 赵平娟 1 ; 刘志昕 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室

关键词： 人工合成靶序列;番木瓜环斑病毒;番木瓜叶扭曲花叶病毒;RNAi表达载体

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2016 年 43 卷 07 期

页码： 81-86

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部分重叠的靶序列,并通过引物设计时添加的特定酶切位点两个靶序列反向连接,形成以长靶序列的5’一部分序列作为发夹结构的环,不需要另外插入内含子序列的反向重复发夹结构的RNAi表达载体pPTN-LS。该方法构建的RNAi表达载体,不仅具有快速、稳定性高等优点,还能同时靶标PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和Hc-Pro基因多个保守区域的靶序列,能有效提高沉默效率,为利用RNAi技术培育广谱、高效、稳定且安全性高,同时抗PRSV和PLDMV病毒病的转基因番木瓜新种质的奠定基础。

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