文献类型： 中文期刊
作者： 邬强 1 ; 辛毅 1 ; 马郁芳 1 ;
作者机构： 1.海南医学院检验医学系;中国热带农业科学院热带生物技术研究所;大连医科大学生物化学教研室;大连医科大学生物化学与分子生物学教研室
关键词： 结核分枝杆菌;克隆;包涵体;蛋白质可溶性
期刊名称： 中国公共卫生
ISSN： 1001-0580
年卷期： 2009 年 10 期
页码： 1204-1206
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的优化结核分枝杆菌wbbL基因在大肠埃希菌中的表达,获得大量可溶性产物并加以鉴定。方法不同条件下诱导pET16b-wbbL质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达;建立外源重组蛋白质与分子伴侣在大肠埃希菌中的共表达体系,优化其表达条件;超声破碎诱导表达的大肠埃希菌,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物;免疫蛋白印迹(Western blotting)法对重组蛋白质进行鉴定。结果共表达体系优化表达的蛋白质主要以可溶性形式存在,经0.5 g/L L-阿拉伯糖30℃诱导5 h、0.5 mmol/L异丙酸-D-硫代半乳糖苷30℃诱导2 h时,可溶性目的蛋白的产量最多,占细胞蛋白总量的55.6%,且所表达的蛋白质为wbbL基因产物。结论在大肠埃希菌中成功表达出大量可溶性结核分枝杆菌wbbL蛋白质,为研究其酶促反应动力学特征以及建立完善的筛选抗结核药物的酶反应体系提供了基础。
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