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大麦醇溶蛋白基因片段克隆和RNAi植物表达载体构建

文献类型： 中文期刊

作者： 闫永荣 1 ; 张正英 1 ; 李静雯 1 ; 李淑洁 1 ;

作者机构： 1.甘肃省农业科学院生物技术研究所

关键词： 大麦;醇溶蛋白;RNAi表达载体

期刊名称： 科技导报

ISSN： 1000-7857

年卷期： 2010 年 28 卷 12 期

页码： 54-57

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了降低啤酒大麦蛋白的含量,提高啤酒大麦品质,利用甘肃推广面积最大的品种甘啤4号为材料,克隆大麦醇溶蛋白基因保守区序列,构建RNAi表达载体。根据已知大麦醇溶蛋白基因保守序列设计一对特异性引物B2PF5′-CAACCATTTC-CACAGCAACCACCAT-3′,B2PR5′-GAAAGATAGAGTAGACGATTGCACG-3′,采用PCR技术从甘啤4号大麦基因组中获得了1个349bp片段(GP4)。依据载体pHANNIBAL和pART27的结构,分别将GP4按所对应酶切位点正反向插入,利用热激法转化。结果分析显示,克隆出的片段与GenBank(NCBI)中醇溶蛋白基因核苷酸序列同源性高达92%,所构建成的RNAi表达载体pART27-pHAN-GP4中含目标片段。

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