文献类型： 中文期刊

作者： 钱微 ¹ ; 刘燕 ¹ ; 肖琛闻 ¹ ; 韦强 ¹ ; 季权安 ¹ ; 鲍国连 ¹ ; 姚火春 ² ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

2.南京农业大学动物医学院

关键词： 兔支气管败血波氏杆菌;CyaA;荧光定量PCR;检测

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2013 年 21 卷 004 期

页码： 498-504

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立特异、敏感、快速检测兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以Bb的毒力因子CyaA为目的基因设计特异性引物和探针,并将PCR扩增产物克隆测序,测序结果与GenBank上Bb的CyaA的同源性达100%.以阳性克隆质粒作为定量检测标准品建立标准曲线,以提取的Bb基因组DNA为模板,进行特异性、灵敏度和重复性实验.该方法对波氏杆菌基因组DNA检测最低限为0.32 pg,灵敏度是普通PCR的25倍,与临床常见细菌无交叉反应.对45份疑似感染兔波氏杆菌病料的检测表明,TaqMan荧光定量PCR和普通PCR检测阳性率分别为75.6%和66.7%,两者符合率88.2%.结果表明,建立的TaqMan荧光定量Bb检测方法具有较好的特异性、敏感性和重复性.该方法的建立对Bb的临床高效诊断,Bb的防控提供了有效手段.