文献类型： 中文期刊

作者： 曾广娟 ¹ ; 李春敏 ² ; 张新忠 ³ ; 滕云龙 ¹ ; 董文轩 ¹ ;

作者机构： 1.沈阳农业大学园艺学院

2.河北省农林科学院昌黎果树研究所

3.中国农业大学园艺植物研究所

关键词： 双向电泳;蛋白质提取方法;苹果叶片;蛋白质组学分析

期刊名称： 色谱

ISSN： 1000-8713

年卷期： 2009 年 27 卷 04 期

页码： 484-488

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了探索适用于双向电泳(2-DE)分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3~10的线性固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)胶条作为第一向电泳,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(12.5%的分离胶)作为第二向电泳,对提取物进行2-DE分离,采用银染显色。结果表明,上述4种方法在2-DE图谱上分别得到140,215,181和616个蛋白质点。其中以改良的Tris-HCl提取法得到的蛋白质点数最多,且背景清晰、图谱上没有明显的横纵条纹。为了进一步验证改良的Tris-HCl提取法的有效性,用18cm、pH3~10的线性IPG胶条和12.5%的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质进行2-DE分离,考马斯亮蓝R-250染色,共检测到455个蛋白质点,其相对分子质量主要分布在14000~66000范围内,图谱背景清晰,再次证明应用该方法制备的样品适用于双向电泳分析,可用于苹果叶片的蛋白质组学分析。