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橡胶树HbJAZ3突变体蛋白的原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 何鑫 1 ; 吴绍华 2 ; 邓顺楠 2 ; 陈月异 2 ; 田维敏 2 ;

作者机构： 1.海南大学园艺园林学院

2.中国热带农业科学院橡胶研究所农业部

关键词： 巴西橡胶树;HbJAZ3;原核表达;定点突变技术;蛋白纯化

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2013 年 34 卷 10 期

页码： 1902-1906

收录情况： CSCD

摘要： 植物JAZ蛋白是茉莉酸信号调控途径的关键环节之一。HbJAZ3基因是橡胶树乳管细胞中编码JAZ蛋白的基因家族成员之一。本文采用原核表达和定点突变技术,构建了pET28a(+)-JAZ3、pET28a(+)-JAZ3-ZIM-mut(缺失ZIM结构域中TIFY基序)和pET28a(+)-JAZ3-Jas-mut(缺失Jas结构域的保守氨基酸FLEKRK)的His标签融合蛋白表达载体,并成功转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。在37℃条件下,用1 mmol/L IPTG诱导2 h能够诱导目的蛋白以包涵体的形式大量表达。通过镍柱纯化了目的蛋白,获得了HbJAZ3及其ZIM结构域和Jas结构域的突变体蛋白,为进步一鉴定乳管细胞茉莉酸信号途径的关键环节打下了良好基础。

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