文献类型： 中文期刊

作者： 闫晓红 ¹ ; 王慧 ² ; 叶艳英 ² ; 曾钢 ² ; 马荣才 ² ; 米福贵 ¹ ; 姚磊 ² ;

作者机构： 1.内蒙古农业大学生态环境学院

2.北京市农林科学院农业生物技术研究中心

关键词： LoxP-FRT融合位点;植物表达双元载体;农杆菌介导;植物遗传转化;标记基因删除

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2012 年 10 卷 03 期

页码： 130-138

收录情况： CSCD

摘要： 在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的植物遗传转化中,常常需要用到植物表达双元载体。为便于基因工程操作并能在获得转基因植物后方便将标记基因删除,我们构建了植物表达双元载体pYBA100,以满足用于生产安全转基因植物的需要。本研究通过融合PCR方法,尽可能去除所有非必需的序列,将pYBA载体最小化。pYBA载体在大肠杆菌中为多拷贝,骨架为3.69kb。我们构建的含NptⅡ植物筛选标记基因的载体pYBA100仅为5.37kb,多克隆位点为22个,方便基因工程操作。载体pYBA100的T-DNA植物筛选基因表达框两侧预留有LoxP-FRT融合位点,方便在获得转基因植物后通过Cre或FLP重组酶将植物筛选标记基因删除。pYBA100载体能于大肠杆菌和农杆菌中自我复制,并成功转化了拟南芥,符合农杆菌介导的植物转基因要求。离体删除实验结果证明,载体pYBA100能经Cre重组酶删除植物标记基因表达框。