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香蕉红素氧还蛋白酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 程萍 1 ; 冯仁军 2 ; 袁克华 2 ; 张银东 2 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.海南大学农学院;中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 香蕉红素氧还蛋白;SMART法;cDNA文库;酵母双杂交

期刊名称： 生命科学研究

ISSN： 1007-7847

年卷期： 2009 年 04 期

页码： 349-353

收录情况： CSCD

摘要： 结合改良的BD SMARTTMPCR cDNA Synthesis KitUser Manual cDNA合成试剂盒,反转录合成带有目的接头cDNA第一链,通过LD-PCR,扩增双链cDNA(dscDNA).产物经双酶切后回收,与经同样双酶切的酵母双杂交系统中pGADT7载体连接转化,并进行了鉴定.结果表明:提取的RAN的A260/A280=1.82,表明所提RNA纯度高;双链cDNA文库大于0.2kb,且弥散较长,成瀑布条带状;根据生长菌落计数,文库含有1.2×106转化子,重组子不同插入片段在0.3~2kb之间,表明该文库达到建库要求,为下一步进行酵母双杂交试验奠定基础.此方法用于构建cDNA文库与酵母双杂交系统相结合的研究目前尚未见过相关报道.

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