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毛白杨PtoeIF5A4的原核表达、纯化及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 张杰伟 1 ; 管阳 1 ; 朱丹 1 ; 陈亚娟 1 ; 丁莉萍 1 ; 王宏芝 1 ; 魏建华 1 ;

作者机构： 1.北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室

关键词： 毛白杨;PtoeIF5A4;原核表达;蛋白纯化

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2014 年 0 卷 05 期

页码： 83-87

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获取大量高纯度的毛白杨PtoeIF5A4蛋白以便研究其特性和生物学功能,以pGEM-T Easy-PtoeIF5A4质粒为模板,PCR扩增毛白杨PtoeIF5A4基因的cDNA编码区,测序正确后,经酶切将其插入到原核表达载体pET28a上,然后将表达载体转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经不同浓度IPTG诱导培养后发现,0.1 mmol/L IPTG,28℃诱导4 h时目的蛋白最多,且该重组蛋白主要以可溶性的形式存在。采用亲和纯化从可溶性蛋白中纯化到大小为18 kD的蛋白条带。Western blotting分析发现亲和纯化所得蛋白可以与His单克隆抗体发生免疫交叉反应,表明纯化所得蛋白是PtoeIF5A4重组蛋白。

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