文献类型： 中文期刊
作者： 蔡肖 1 ; 李兴河 1 ; 王海涛 1 ; 刘存敬 1 ; 唐丽媛 1 ; 张素君 1 ; 张建宏 1 ;
作者机构： 1.河北省农林科学院棉花研究所/农业农村部黄淮海半干旱区生物学与遗传育种重点实验室/国家棉花改良中心河北分中心
关键词： 棉花;互作蛋白;酵母双杂交;非生物胁迫;GhJAZ1
期刊名称： 核农学报
ISSN： 1000-8551
年卷期： 2023 年 37 卷 011 期
页码： 2158-2165
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 非生物胁迫导致棉花生长发育受到抑制,严重影响棉花的产量和品质.为了深入探究棉花非生物逆境响应的分子作用机制并鉴定GhJAZ1的互作蛋白,本研究以陆地棉标准系TM-1为材料,采用Gateway重组技术构建了非生物胁迫诱导的陆地棉酵母双杂交cDNA文库,获得的初级文库总克隆数为1.2×107 CFU,次级文库总克隆数为1.6×107 CFU,重组阳性率100%,酵母文库滴度为5.0×107 cells·mL-1,酵母克隆平均插入片段>1 000 bp,符合建库标准,可用于后续酵母双杂交筛选.以GhJAZ1为诱饵,构建pGBKT7-GhJAZ1诱饵蛋白表达载体,经毒性检测及自激活活性检测,明确了诱饵质粒在酵母系统中无毒性和自激活活性,可直接用于酵母文库筛选.利用酵母双杂交筛选构建的非生物胁迫诱导的酵母cDNA文库,得到72个初筛阳性克隆,经测序、序列比对和酵母回转验证,获得11个与GhJAZ1相互作用的候选蛋白.选取其中4个候选蛋白,利用酵母双杂交进一步确认了GhJAZ1与候选蛋白的相互作用关系.本研究结果为深入分析棉花非生物胁迫响应的调控网络奠定了良好的基础,为解析GhJAZ1低温应答分子机理提供了重要参考.
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