文献类型： 中文期刊
作者： 陈绪清 1 ; 张晓东 1 ; 梁荣奇 1 ; 曹鸣庆 1 ;
作者机构： 1.北京农业生物技术研究中心
关键词： 甜菜碱;长片段PCR
期刊名称： 生物工程学报
ISSN： 1000-3061
年卷期： 2004 年 20 卷 05 期
页码： 75-78
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 聚合酶链式反应 (PCR)作为一项非常成熟的技术可以用于基因组序列的扩增。普通的PCR技术只适合于短片段DNA的扩增 ,一般在 6kb以下。对于 6kb至十几kb甚至几十kb以上的DNA片段的扩增就非常困难。通过添加不同化学物质 ,发现甜菜碱对长片段PCR的扩增有非常有效的增强作用。通过对玉米总DNA以及质粒DNA的扩增 ,发现 1mol L到 2 5mol L甜菜碱对改进PCR扩增效果明显。通过添加甜菜碱 ,可以从玉米基因组中扩增出 9kb以上的单拷贝片段 ,从质粒中扩增出 16kb以上片段。经过试验 ,发现不同GC含量的引物需要使用不同浓度的甜菜碱。甜菜碱可以减少甚至消除长片段PCR中的非特异性扩增。同时 ,我们发现其它的添加物 ,如DMSO ,甘油 ,甲酰胺对长片段PCR的作用不明显
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