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豇豆胰蛋白酶抑制剂和硫氧还蛋白的融合表达和活性测定

文献类型： 中文期刊

作者： 畅文军 1 ; 王宇光 1 ; 雷禄旺 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室

关键词： 豇豆胰蛋白酶抑制剂;硫氧还蛋白;结构设计;融合蛋白表达;生物农药

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2006 年 14 卷 02 期

页码： 226-230

收录情况： CSCD

摘要： 采用融合蛋白表达技术,通过1个人工设计合成的柔性接头,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpeatrypsininhibitor,CpTI)基因与表达载体上的硫氧还蛋白(thioredoxin)基因连接,构建了融合表达载体。将表达载体转入大肠杆菌(Escherichiacoli)GI724,通过色氨酸诱导获得高效表达,产物以可溶状态存在。活性测定显示,融合蛋白具有抑制胰蛋白酶的生物学活性。以大豆胰蛋白酶抑制剂为参照,将融合蛋白热处理后进行活性测定,发现它具有较好的热稳定性。将肠激酶(enterokinase)与融合蛋白在37℃作用16h,可获得切掉thioredoxin的CpTI蛋白。活性测定显示,切除thioredoxin后CpTI的胰蛋白酶抑制活性比同样处理条件下的thioredoxin-CpTI明显下降,比活力仅为原来的80%,说明融合蛋白具有更高的稳定性。研究结果为thioredoxin-CpTI作为一种生物农药的应用奠定了基础。

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