文献类型： 中文期刊

作者： 毕政鸿 ¹ ; 李哲 ² ; 王志秋 ² ; 戴雪梅 ² ; 方家林 ² ; 黄华孙 ² ; 林位夫 ² ; LARDE TLudovic ² ; MONTORO Pascal ² ; CARRON Marc-Philippe ² ; LECLERCQ Julie ² ; 左建儒 ² ; 牟金叶 ² ; 杨晓辉 ² ; 李响 ² ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.海南大学农学院;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家重要热带作物工程技术研究中心;法国农业研究国际合作中心生物系统部;中国科学院遗传与发育生物学研究所;海南大学环境与植物保护学院

关键词： 橡胶树;农杆菌介导的遗传转化;AtMYB118基因;反转录PCR;易碎胚性愈伤组织;转基因植株

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2014 年 45 卷 07 期

页码： 1137-1146

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】采用正交设计L25(56)优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考。【方法】以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度(OD600)、乙酰丁香酮(AS)浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响。【结果】6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为:预培养0 d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5 d,AS 200μmol/L,共培养温度25℃。在此优化条件下可获得最高转化频率。经过4~6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系。经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptII、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达。培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6%;最终获得4株转AtMYB118基因植株。【结论】优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持。