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8种柱花草属牧草SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 张龙 1 ; 丁西朋 2 ; 严琳玲 2 ; 胡珊娜 1 ; 白昌军 2 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所

关键词： 柱花草;改进CTAB法;SSR-PCR;体系优化;引物筛选

期刊名称： 草业科学

ISSN： 1001-0629

年卷期： 2014 年 31 卷 02 期

页码： 232-242

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 柱花草(Stylosanthes)是优良的豆科牧草,叶片中含有大量的多糖多酚,本研究利用改良CTAB法抽提柱花草叶片中总DNA。通过正交试验设计L16(45),确立了柱花草SSR-PCR最佳反应体系:20μL体系中1μL 50ng·μL-1模板DNA,1.6μL 5μmol·L-1引物,1.6μL 10mol·L-1dNTPs,1.2μL 25mol·L-1 Mg2+,0.3μL 5U·μL-1 Taq聚合酶,2μL 10×PCR Buffer(Mg2+free),剩余用ddH2O补足。扩增反应程序为94℃变性40s,Tm(不同退火温度)退火时间40s,72℃延伸45s,循环数35个。利用优化体系对来自7种柱花草的123对SSR引物在8个不同种柱花草中进行转移,共筛选出44对引物在8种柱花草中都能有效扩增,并从中筛选出26对在8个不同种柱花草中富含多态性引物,为今后利用SSR标记对柱花草属的指纹图谱构建、遗传多样性分析、分子育种和品种鉴定与保护等工作提供重要依据。

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