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农杆菌介导甘蔗基因转化技术的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 罗敬萍 1 ; 张树珍 1 ; 杨本鹏 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室

关键词： 农杆菌;GFP基因;遗传转化;甘蔗

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2003 年 24 卷 04 期

页码： 23-28

收录情况： CSCD

摘要： 以甘蔗(Saccharum officinarum L.)品种ROC10为转化受体材料,以GFP基因为报告基因,通过对农杆菌介导遗传转化的一系列条件,包括农杆菌菌株及侵染菌液浓度、侵染时间、受体愈伤组织龄期、AS活化时间及使用浓度、共培养时间等进行优化,同时进行了便于vir基因活化和T-DNA转移的条件组合,如附加果糖和葡萄糖、酸性环境感染,低温共培养等,从而建立了一个可行、有效而又简便的农杆菌介导的甘蔗遗传转化体系。结果表明:农杆菌菌株EHA105优于LBA4404,其适宜侵染浓度D_(600)为1.3752;适宜受体愈伤组织龄期为25℃暗培养25d;适宜侵染时间为30min;适宜AS活化时间为2h,使用浓度为200μmol·L~(-1);适宜共培养时间为4d。获得2株有荧光信号的植株,对这2株植株进行斑点Southern杂交检测,均有阳性反应,证明GFP基因已整合到甘蔗基因组中并得到了有效表达,表明该转化体系确实是有效的。

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