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槟榔隐症病毒1型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 林兆威 1 ; 牛晓庆 1 ; 唐庆华 1 ; 宋薇薇 1 ; 孟秀利 1 ; 覃伟权 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院椰子研究所/海南省院士创新平台/海南省槟榔产业工程研究中心

关键词： 槟榔;槟榔隐症病毒1型;TaqMan实时荧光定量PCR

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2021 年 011 期

页码： 3087-3092

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立一种快速、精准且能定量分析槟榔隐症病毒1型（Areca palm velarivirus 1, APV1）的检测方法。本研究参照GenBank中已登录的APV1全基因组序列,在p21蛋白基因保守区域和p60蛋白基因保守区域之间设计1对特异性RT-PCR引物,并构建阳性重组质粒;在p60蛋白基因保守区域部分设计荧光定量PCR特异性引物和TaqMan-MGB探针,利用阳性重组质粒,构建标准曲线,并对该检测方法的敏感性、特异性、稳定性及其应用效果进行验证。结果显示:该方法对阳性质粒标准品检测的敏感性达3.0×101copies/μL级别,是常规RT-PCR敏感性的100倍;标准曲线显示,Ct值与拷贝数的对数呈线性关系,其标准曲线方程为y=-3.2748x+42.957,扩增效率为102%,相关系数R2为0.9992;该方法对APV1的检测具有较好的特异性,其他槟榔病原物及内生菌不会对本方法产生非特异性干扰;批内与批间重复性试验结果显示,该方法对APV1的检测具有较好的重复性和稳定性;利用该方法对海南万宁、琼海、定安、文昌等4个市（县）采集的181份疑似样品进行检测,阳性率分别为91.95%、86.95%、89.65%、73.68%,其阳性的病毒拷贝数最高达1.59×107 copies/μL,表明海南部分地区APV1病毒载量较高、流行情况比较严重。

  • 相关文献

[1]槟榔黄化植原体TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立. 林兆威,孟秀利,唐庆华,牛晓庆,宋薇薇. 2024

[2]海南槟榔产业前景分析. 周焕起.

[3]槟榔资源鲜果的质构评价研究. ZHOU Huanqi,周焕起,HUANG Liyun,黄丽云,LIU Liyun. 2015

[4]海南屯昌县生态型高新农业调查报告. 谭勇,温春生,陈秋波. 2009

[5]低温对槟榔幼苗生理生化特性的影响. 吴敏,曹红星,冯美利,陈思婷,王贵美,李杰. 2010

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