文献类型： 中文期刊
作者： 林智敏 1 ; 耿丽丽 2 ; 苏军 1 ; 束长龙 2 ; 王锋 1 ; 朱延明 3 ; 张杰 2 ;
作者机构： 1.福建省农业科学院农业遗传工程重点实验室
2.中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室
3.东北农业大学生命科学学院
关键词： cry1Ah1基因;水稻;密码子优化;实时荧光定量PCR;酶联免疫
期刊名称： 生物工程学报
ISSN： 1000-3061
年卷期： 2012 年 28 卷 10 期
页码： 1184-1194
收录情况： CSCD
摘要： cry1Ah1基因是本实验室克隆的具有自主知识产权的模式基因,对鳞翅目害虫水稻二化螟等具有高毒力,具有较好的应用前景。为提高cry1Ah1基因在水稻中的表达量,探讨密码子使用频率对基因表达的影响,依据水稻密码子使用频率设计5种不同的优化方案,提高GC含量并去除剪切信号等不稳定因素后合成cry1Ah1基因杀虫活性区域。优化后的基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中正常表达了65 kDa蛋白,表达蛋白对2龄小菜蛾和水稻二化螟初孵幼虫都具有良好的杀虫活性。优化的基因转化水稻日本晴后,PCR阳性率达到87%以上,实时荧光定量RT-PCR和ELISA分析表明全部采用最高频率密码子的优化方案效果最好,Cry1Ah蛋白平均表达量占可溶性蛋白的0.104%。
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