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北美海蓬子盐胁迫条件下抑制差减文库构建与分析

文献类型: 中文期刊

作者: 李吉涛 1 ; 龙建琪 2 ; 叶妙水 1 ; 张桂和 3 ; 郭建春 1 ;

作者机构: 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

2.湖南省桃江县农业局

3.海南大学海洋学院

关键词: 北美海蓬子(Salicornia Bigelovii Torr.);盐胁迫;抑制差减文库

期刊名称: 分子植物育种

ISSN: 1672-416X

年卷期: 2007 年 5 卷 03 期

页码: 377-383

收录情况: CSCD

摘要: 北美海蓬子(Salicornia Bigelovii Torr.)是一种耐盐性极强的真盐生植物,在200mmol/L的Na+浓度下生长,其高度和含汁量是5mmol/LNa+浓度下生长的2倍和2.5倍。为了研究北美海蓬子耐盐的机理和分离耐盐新基因,我们构建了在盐胁迫条件下北美海蓬子基因表达差异的SSH文库。以北美海蓬子种子播种于0mmol/LNaCl MS液体培养基上幼苗(0号材料)的总RNA为Driver,200mmol/LNaCl诱导24h幼苗(2号材料)的总RNA为Tester,运用SMART PCR cDNA合成技术分别合成全长cDNA。将两种cDNA群体进行抑制差减杂交,用T/A法分别构建了盐胁迫相关基因的正向差减文库(205个克隆子)和反向差减文库(235个克隆子)。通过PCR和反式NorthernDot-Blot消除假阳性和重复克隆子,得到在盐胁迫下特异表达的阳性克隆85个。对测序结果正常的81个克隆进行BLASTn分析,其中有70个cDNA序列与已经报道的其它物种的核酸序列具有较高的同源性;另外11个cDNA序列未找到有较高相似性的已知序列。81个cDNA序列中没有与北美海蓬子中已报道的核酸序列有较高的相似性,因此,所有81个克隆序列都是北美海蓬子中的新基因。

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