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西伯利亚鲟(Acipenser baerii)IFN-γ基因克隆、原核表达和单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 田照辉 1 ;

作者机构： 1.北京市农林科学院水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心(北京)

关键词： 西伯利亚鲟;IFN-γ基因;原核表达;重组蛋白;单克隆抗体

期刊名称： 生物学杂志

ISSN： 2095-1736

年卷期： 2024 年 41 卷 006 期

页码： 69-73,110

收录情况： CSCD

摘要： 利用转录组信息克隆西伯利亚鲟IFN-γ的可读编码框(ORF)528 bp,编码176个氨基酸，具有IFN-γ的特征序列和核定位序列，参照此序列构建N端含有6His (组氨酸)的原核表达载体Pet30α-IFN-γ,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达，SDS-PAGE蛋白电泳和免疫印迹Western Blot鉴定，重组蛋白为22.8 ku,主要以包涵体形式存在，温度37℃时的最佳表达条件为0.75 mmol/L的IPTG诱导6 h,利用镍柱层析得到纯化的重组蛋白，重组蛋白免疫小鼠，进行细胞融合获得8株阳性细胞株，利用protein G亲和层析纯化的单克隆抗体效价为2×10～5,为深入研究西伯利亚鲟IFN-γ免疫学功能奠定基础。

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