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菊花SSR-PCR反应体系的建立和优化

文献类型： 中文期刊

作者： 李亚慧 1 ; 黄丛林 2 ; 董然 1 ;

作者机构： 1.吉林农业大学园艺学院

2.北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心

关键词： 菊花;SSR标记;正交设计;反应体系优化

期刊名称： 北方园艺

ISSN： 1001-0009

年卷期： 2012 年 13 期

页码： 135-139

收录情况： 北大核心

摘要： 为快速确定菊花SSR反应体系,利用正交实验设计L16(45)对菊花基因组SSR-PCR反应体系的5个因素(模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和Taq酶)在4个水平上进行正交设计,筛选出适合菊花的最佳SSR-PCR反应体系,进一步利用单因素完全随机试验筛选各反应因素的最佳水平。结果表明:建立菊花基因组DNA SSR-PCR反应体系为25μL:60ng模板DNA、2.0mmol/L Mg2+、0.1mmol/L dNTP、0.3μmol/L引物、1UTaq酶。并对菊花引物进行梯度退火试验,其最佳退火温度在53.1℃;扩增程序是:95℃预变性5min;32个循环的94℃变性50s、53.1℃退火50s、72℃延伸50s;72℃延伸8min,4℃保存。该体系的建立为今后菊花SSR分析奠定了基础。

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