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盐生植物海马齿盐胁迫全长cDNA文库的构建与分析

文献类型: 中文期刊

作者: 郑善清 1 ; 段瑞军 1 ; 郭建春 1 ;

作者机构: 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词: 海马齿;盐胁迫;SMART方法;全长cDNA文库

期刊名称: 基因组学与应用生物学

ISSN: 1674-568X

年卷期: 2010 年 29 卷 01 期

页码: 155-159

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 为了研究盐生植物耐盐基因表达调控,本实验以海水浇灌的海马齿植株为供试材料,构建了盐胁迫下的全长cDNA文库。构建方法如下:采用改良的CTAB法提取总RNA,SMART法反转录合成cDNA,LD-PCR方法合成双链cDNA。LD-PCR产物经蛋白酶K消化和SfiⅠ酶切后,经CHROMA SPIN+TE-1000分离柱子除去小片段DNA后,回收0.5kb以上的片段,按照适当的比例连接λTripIEX2载体。连接产物利用MaxPlaxTMLambda Packaging Extracts进行体外包装,得到海马齿初级cDNA文库。初始文库的独立克隆数为2.4×106pfu,初级文库滴度大于4.80×106pfu/mL,重组率为93.75%,插入片段为0.5~5kb,扩增文库的滴度为1.21×109pfu/mL,所得文库质量较高。本研究表明该cDNA文库适合于盐生植物海马齿相关基因的克隆和分析。

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