文献类型： 中文期刊
作者： 彭军 1 ; 杨腊英 2 ; 王国芬 2 ; 郭立佳 2 ; 汪军 2 ; 黄俊生 2 ;
作者机构： 1.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室
2.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室;中国农业大学
关键词： 番木瓜;瞬时表达分析;农杆菌浸润;microRNA
期刊名称： 热带作物学报
ISSN： 1000-2561
年卷期： 2011 年 32 卷 10 期
页码： 44-48
收录情况： CSCD
摘要： 农杆菌浸润瞬时表达方法不仅在蛋白互作、鉴定基因沉默抑制子及基因功能研究方面得到广泛应用,目前还应用在小RNA的研究中。在对植物microRNA的研究中,农杆菌浸润方法通过将将转基因导入农杆菌浸润本生烟瞬时表达,可以快速、稳定地对植物microRNA进行检测和鉴定,样品在几天内就可分析完成,比获得稳定遗传的转基因有优势。笔者借鉴国外拟南芥microRNA瞬时表达分析的方法,克隆了番木瓜的miR62a前体序列连接到双元表达载体pSuper1300上构建成35S::cpa-miR162a质粒,导入农杆菌GV3101后浸润本生烟,浸润后48 h提取本生烟叶片总RNA后通过miRNA northern blot检测到miR162a,而本生烟和番木瓜自身则无法检测到低丰度的miR162a。本文介绍的农杆菌浸润瞬时表达方法能够在体外加工产生成熟的miRNA,该技术有助于对microRNA的结构-功能的相关性及靶标验证进一步研究。
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