文献类型： 中文期刊

作者： 周洁 ¹ ; 王栩鸣 ¹ ; 陈斌 ¹ ; 陈娟 ¹ ; 杨勇 ¹ ; 余初浪 ¹ ; 严成其 ¹ ; 陈剑平 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所省部共建国家重点实验室培育基地

关键词： 入门载体;BiFC;基因互作;Gateway

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2013 年 25 卷 05 期

页码： 1024-1030

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染烟草的方法观察荧光互作结果。构建的Gateway入门载体,由于带有ccdB基因,非线性化的载体无法在ccdB敏感菌株中生长,因此消除了载体本身的背景。同时由XcmⅠ酶切后产生的T突出,可以很好地与PCR产物结合,连接效率和普通商业化T载体一致。此外,由于载体可由实验室自行制备且采用了TA克隆,创制入门克隆的成本大大降低。借助该研究改造的BiFC目标载体,目的基因能快速地重组到目的载体用于基因互作鉴定。利用本研究构建的Gateway系统,能够以较低成本快速的进行基因克隆和互作研究。