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具血型转换功能的咖啡α-半乳糖苷酶基因的克隆与表达

文献类型： 中文期刊

作者： 梁素钰 1 ; 郑学勤 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室

关键词： α-半乳糖苷酶;cDNA克隆;咖啡豆;B→O血型转换;P.pastoris

期刊名称： 遗传

ISSN： 0253-9772

年卷期： 2005 年 27 卷 05 期

页码： 759-764

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从大粒种咖啡(Coffea liberica)和中粒种咖啡(Coffea canephora)中分离克隆到了α-半乳糖苷酶(α-D-galactosidase)cDNA的开放阅读框架即编码区,分别记为Gal-D与Gal-Z,长度与已发表的小粒种咖啡cDNA编码序列相同均为1 089 bp,同源性与已发表的小粒种咖啡cDNA编码序列相比分别为98.7%和99.27%。将克隆到的Gal-D与Gal-Z用巴斯德毕赤氏酵母Pichia pastoris表达载体pPICZαA(分泌甲醇诱导型)和pGAPZαA(分泌组成型)成功地构建了如下酵母表达载体:pPICZαA/Gal-Z,pPICZαA/Gal-D和pGAPZαA/Gal-D,并转入酵母宿主菌GS115进行了发酵表达研究。实验得出工程菌株pPICZαA/Gal-D/GS115的重组表达产物酶活最高可达48.22(U/mL),对发酵产物进行了SDS-PAGE电泳,得到一条清晰的主条带。

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