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联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化

文献类型： 中文期刊

作者： 钟胜 1 ; 段瑞军 1 ; 郭建春 1 ; 胡新文 1 ; 符少萍 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： CBF3冷诱导表达载体;CBF3和AtGolS3双基因表达载体;拟南芥转化

期刊名称： 安徽农业科学

ISSN： 0517-6611

年卷期： 2008 年 36 卷 01 期

页码： 59-61

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3)基因以及基因上游启动子的DNA序列:CP-CBF3,共2 075 bp。CP是CBF3基因的启动子,受低温诱导。用EcoRI和BamHI双酶切CP-CBF3并置于植物表达载体pCAMBIA1300中,构建CBF3基因冷诱导表达载体pCA-CP-CBF3。然后将带有组成型启动子的肌醇半乳糖苷酶基因AtG-loS3合并于pCA-CP-CBF3中,构建双基因植物表达载体pCA-CP-CBF3-35S-AtGloS3。用真空抽滤虑法将这两个表达载体转化到拟南芥中,并用潮霉素筛选出转基因植物苗。[结果]CBF3和AtGloS3基因均来自拟南芥,而CBF3不存在内含子,AtGloS3基因存在内含子,故以CB-1、CB-2为引物的非转基因植物中也能得到带,而以AT-1、AT-2为引物的非转基因植物不能得到带。[结论]该研究中pCA-CP-CBF3是1个对照,实验的后续工作需进一步进行。

  • 相关文献

[1]蜻蜓凤梨AfPIN的克隆、载体构建及遗传转化. 张学全,张静,李志英,雷明,徐立. 2015

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