文献类型： 中文期刊

作者： 董慧 ¹ ; 王劭 ¹ ; 朱小丽 ¹ ; 郑欣 ¹ ; 陈少莺 ¹ ; 陈仕龙 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 新型鸭呼肠孤病毒;σB基因;原核表达;蛋白纯化

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2025 年 40 卷 007 期

页码： 656-661

收录情况： CSCD

摘要： [目的]以新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)NP03株σB基因为研究对象,通过原核表达体系优化,获得可溶性表达的NDRV σB蛋白,为该病毒的检测及防治提供参考.[方法]将双酶切鉴定后的重组质粒pET-32a-σB转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,使用IPTG诱导表达重组σB(rσB)蛋白.菌体超声破碎后,SDS-PAGE分析rσB蛋白的表达情况.进一步利用His标签蛋白纯化试剂盒对上清液中的rσB蛋白进行亲和层析纯化,并以纯化后的rσB蛋白作为包被抗原建立间接ELISA检测方法.[结果]在 0.5 mmol·L-1 IPTG、16℃条件下诱导 12h时,超声破碎后的上清液中可检测到目的蛋白,rσB蛋白的可溶性表达水平显著提高.SDS-PAGE分析显示纯化的rσB蛋白纯度高于 90%,分子量约为 60 kDa.Western blot结果显示,纯化的rσB蛋白可与His标签单克隆抗体特异性反应;基于该蛋白建立的间接ELISA检测方法显示,NDRV阳性血清的OD450 值为 1.75,显著高于番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)和番鸭小鹅瘟病毒(Muscovy duck-origin goose parvovirus,MDGPV)等对照病毒阳性血清(OD450 均小于 0.3).Western blot和ELISA结果表明,纯化后的rσB蛋白具有较好的特异性的反应原性.[结论]通过低温与低浓度IPTG诱导,成功建立了NDRV σB蛋白的可溶性原核表达体系,突破了该蛋白因包涵体形式表达导致的功能与应用研究瓶颈,为开发NDRV血清抗体ELISA检测试剂盒奠定了物质基础.