文献类型： 中文期刊

作者： 刘丹 ¹ ; 李焕宇 ¹ ; 付婷婷 ¹ ; 张云 ¹ ; 吕天佑 ¹ ; 李远 ¹ ; 李敏权 ¹ ; 徐秉良 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学草业学院

关键词： 真菌DNA提取;CTAB;正交试验

期刊名称： 甘肃农业大学学报

ISSN： 1003-4315

年卷期： 2017 年 52 卷 02 期

页码： 139-145

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】从统计学的角度明确CTAB法提取真菌DNA过程中各因素的影响,确定CTAB法提取真菌DNA的最优方案.【方法】本试验以菌体量、破壁、抽提、沉淀为考察因素,以核糖体RNA(rRNA)内转录间隔区(ITS)和28SrRNA基因序列的PCR反应扩增率为指标,用SPSS软件设计混合水平正交试验L25(5×34)并进行方差分析.【结果】采用CTAB法提取真菌基因组DNA时,菌体细胞破壁和沉淀DNA这两个步骤对真菌DNA提取效果的影响最大,其次是抽提步骤,在100mg范围内,菌体量对DNA的提取效果影响不大.【结论】采用CTAB法提取DNA时,挑取40~80mg菌体,用带有无菌塑料钻头的手电钻研磨进行菌体细胞的破壁,研磨时可先加入液氮冷冻后再进行研磨,或直接在冰上研磨,酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提1次,等体积异丙醇沉淀DNA,可以得到较好的DNA提取效果.