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南瓜ISSR-PCR反应体系的建立与优化

文献类型： 中文期刊

作者： 朱海生 1 ; 卢丽芳 2 ; 温庆放 3 ; 林义章 4 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院作物研究所

2.福建省农业科学院作物研究所福建省农业科学院蔬菜研究中心福建农林大学园艺学院

3.福建农林大学园艺学院福建省农业科学院作物研究所福建省农业科学院蔬菜研究中心福建省蔬菜工程技术研究中心

4.福建农林大学园艺学院

关键词： 南瓜;ISSR;分子标记;PCR扩增

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2014 年 04 期

页码： 182-189

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得南瓜ISSR最优扩增体系,为后续南瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以‘密本’南瓜为筛选体系材料,采用单因素试验,对ISSR反应体系的Mg2+、dNTP、Taq酶、引物和DNA浓度等5个因素进行优化。研究结果表明,南瓜ISSR 25μL最佳反应体系为:2.5μL 10×Buffer,2.0 mmol/L Mg2+,0.3mmol/LdNTP,1UTaq酶,0.48mmol/L引物,75ng的DNA。在此基础上,对筛选出的12条引物进行退火温度的优化,最终确定每条引物的最佳退火温度。利用该反应体系,选用引物891对85个南瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强、重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于南瓜的ISSR分子标记。

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