文献类型： 中文期刊
作者： 苏蝶 1 ; 庹德财 1 ; 周鹏 1 ; 言普 1 ; 黎小瑛 1 ; 朱国鹏 1 ; 沈文涛 1 ;
作者机构： 1.海南大学园艺学院;中国热带农业科学院热带生物技术研究所
关键词： 番木瓜畸形花叶病毒;HC-Pro;原核表达;纯化
期刊名称： 分子植物育种
ISSN： 1672-416X
年卷期： 2024 年 22 卷 010 期
页码： 3166-3171
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV,Potyvirus属)是目前威胁中国番木瓜种植的主要病原之一.辅助成分-蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)是PLDMV编码参与病毒运动、复制、媒介传播、基因沉默抑制的多功能蛋白.为了获得HC-Pro基因的纯化蛋白,本研究通过密码子优化HC-Pro基因序列,成功构建原核表达质粒pET-30a-HCPro,经IPTG诱导后实现HC-Pro在大肠杆菌中的原核表达,在0.5 mmol/L IPTG,20 ℃条件下诱导过夜时其表达量最高;破碎菌体后,SDS分析全菌、破碎上清以及沉淀中目标蛋白的表达量,结果显示重组HC-Pro蛋白主要以不可溶的包涵体形式在沉淀中表达;进一步溶解包涵体通过Ni-NTA层析柱进行纯化,在500 mmol/L浓度咪唑下可以获得分子量大小约为54 kD的HC-Pro重组蛋白;Western Blot分析纯化后的目标蛋白,结果显示54 kD处有明显的条带,与预期的HC-Pro重组蛋白大小一致.本研究成功表达并纯化获得了 PLDMV重组蛋白HC-Pro,为后续抗体制备和探究其功能提供了理论基础.
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