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转mCherry基因水稻的遗传分析及T-DNA整合位点的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 李亚丽 1 ; 刘中来 1 ; 周洁 2 ; 徐国娟 1 ; 瞿绍洪 2 ;

作者机构： 1.浙江师范大学

2.浙江省农业科学院

关键词： 水稻;mCherry;转基因;T-DNA;整合位点;遗传分析

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2012 年 10 卷 02 期

页码： 121-130

收录情况： CSCD

摘要： 为了建立转基因水稻的高通量遗传分析系统,本研究以粳稻成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,潮霉素磷酸转移酶(HPT)为抗性筛选标记,通过农杆菌介导的方法将红色荧光蛋白基因mCherry导入水稻。在水稻转化愈伤组织、转化植株(T0)和转基因后代(T1)均检测到红色荧光,证实mCherry在转基因水稻中稳定表达。139个独立转化株系的遗传分析表明,mCherry在转基因后代表现多种遗传模式,54%的转基因株系呈单位点遗传。TAIL-PCR进一步验证转基因整合到水稻基因组。根据T-DNA整合位点DNA序列分析结果,T-DNA左边界发生碱基缺失、增加和替换,右边界只发生碱基缺失,说明左边界比右边界有更多的碱基变异类型。此外,对T2代植株mCherry和HPT的转录水平进行实时定量逆转录PCR分析,结果表明,mCherry和HPT转录水平因T-DNA在水稻基因组中的整合位置而变化,表现位置效应。本研究在mCherry荧光蛋白和其它相关方法的基础上,为转基因水稻遗传及分子分析建立了一个高效的流程体系。

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