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烟草青枯病菌巢式PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 李本金 1 ; 谢世勇 1 ; 刘裴清 1 ; 谢廷鑫 2 ; 陈庆河 1 ; 翁启勇 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院植物保护研究所

2.福建省烟草公司南平市公司

关键词： 烟草;青枯病菌;巢式PCR;分子检测

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2014 年 35 卷 11 期

页码： 2230-2235

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用细菌16S-23S r DNA内源转录间隔区通用引物L1/L2扩增烟草青枯病菌基因组DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,经与近缘种序列多重比对分析后,设计1对特异性引物Rs F/Rs R,用于包括烟草青枯病菌在内的15种不同细菌、5种真菌、3种卵菌基因组DNA的PCR扩增。结果表明:在优化的反应体系与程序条件下,该对引物只能从烟草青枯病菌中扩增出241 bp的特异片段,并通过序列测定验证了其准确性;将引物Rs F/Rs R与细菌通用引物L1/L2进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.4 fg/μL,较常规PCR提高1 000倍,表明该对引物能有效地用于烟草组织及土壤中青枯病菌的检测。此结果对烟草青枯病的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义。

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