文献类型： 中文期刊
作者： 蒋琼海 1 ; 李亚梅 2 ; 李崇晖 2 ; 尹俊梅 2 ;
作者机构： 1.海南大学热带农林学院
2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所
关键词： 秋石斛;筛选标记基因;筛选剂;遗传转化;筛选浓度
期刊名称： 广西植物
ISSN： 1000-3142
年卷期： 2025 年 45 卷 007 期
页码： 1348-1358
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 秋石斛（Phalaenopsis-type Dendrobium hybrids）是热带地区重要观赏植物，其因花形奇特、花色丰富，在花卉市场中具有极高的产业价值。分子育种是突破传统育种局限性的重要手段，筛选标记基因辅助转化可以加速转基因进程。为获得适合于秋石斛遗传转化的筛选标记基因和筛选剂，该研究以‘三亚阳光’和‘诺贝尔’的胚性愈伤组织（ECs）和原球茎为外植体，将其置于含不同浓度卡那霉素、遗传霉素（G418）、潮霉素和双丙氨膦的培养基中，测试其对不同筛选剂的敏感性，观察其生长状态，统计存活率，并以最优筛选标记基因和筛选剂进行遗传转化测试。结果表明：（1）2个品种的外植体对不同筛选剂的敏感性表现一致，即对潮霉素、G418、双丙氨膦较为敏感，而对卡那霉素不敏感；在卡那霉素浓度为700 mg·L-1的培养基中，外植体仍能正常生长。（2）潮霉素、G418和双丙氨膦的最低致死浓度分别为30、50、7 mg·L-1。（3）当以潮霉素作为筛选剂、hpt作为筛选标记基因时，初次筛选采用30 mg·L-1的浓度效果最佳；随着筛选周期的延长，适当提高筛选剂浓度有利于获得转基因株系。该研究明确了秋石斛2个栽培种对不同筛选剂的敏感性及其最低致死浓度，验证潮霉素抗性基因（hpt）、新霉素磷酸转移酶基因（npt）和除草剂抗性基因（bar）都可以作为秋石斛遗传转化体系构建的筛选标记基因，对应筛选剂分别为潮霉素、G418和双丙氨膦。此外，在遗传转化筛选过程中采用筛选剂浓度梯度递增策略，有利于转基因外植体的获得。
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