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蚜虫基因RNAi载体的构建及其在转基因烟草中dsRNA的表达分析

文献类型: 中文期刊

作者: 高朝宝 1 ; 李晓明 2 ; 彭明 3 ; 崔百明 1 ;

作者机构: 1.新疆石河子大学生农业重点实验室

2.山东福田药业有限公司

3.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词: 转基因;RNA干扰;Northern杂交;dsRNA;Cathepsin B基因

期刊名称: 中国农学通报

ISSN: 1000-6850

年卷期: 2011 年 27 卷 15 期

页码: 229-232

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: RNAi机制可以通过dsRNA诱导同源mRNA的降解,从而导致该基因转录后沉默。RNA干扰作用从发现以来就具有了利用转录后基因沉默(PTGS)来进行抗虫的一种潜在可能性。针对dsRNA的这种作用,研究中提取蚜虫RNA,克隆出蚜虫Cathepsin B基因的干扰片段并构建出RNAi载体,转入本氏烟草中,在转基因烟草体内表达dsRNA。成功构建RNAi载体后,通过农杆菌转化和叶盘法将RNAi载体导入烟草中并采用组织培养方法培养出转基因烟草,通过PCR鉴定显示15株生根的转基因烟草中14株显示阳性。提取转基因烟草的RNA进行RT-PCR和Northern表达分析显示转基因烟草植株中dsRNA表达的存在。实验结果说明了在转基因植物体内表达RNAi载体可以产生dsRNA,从而在蚜虫进食植物时达到利用dsRNA抗蚜虫的作用。

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