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橡胶树叶片原生质体分离条件的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 戴雪梅 1 ; 杨先锋 1 ; 辛士超 1 ; 成镜 1 ; 彭素娜 1 ; 华玉伟 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室

关键词： 橡胶树;叶片发育阶段;原生质体分离

期刊名称： 热带农业科学

ISSN： 1009-2196

年卷期： 2018 年 38 卷 03 期

页码： 46-52

摘要： 分别以橡胶树GT1种子实生苗古铜期、变色期、淡绿期和稳定期4个不同发育阶段的叶片为材料进行原生质体的酶解分离研究,同时分析比较不同酶组合、酶解时间和甘露醇浓度等主要因素对橡胶树叶片原生质体产量和活力的影响,建立高效稳定的橡胶树叶片原生质体分离体系,为进行橡胶树外源基因瞬时表达及CRISPR基因编辑等研究快速提供高产优质的原生质体。结果表明:在同等条件下,变色期叶片的原生质体产量和活力最高,分别为14.8×10~7个/g FW和97.3%;其次为古铜期叶片,可达到8.6×10~7个/g FW和95.2%;淡绿期和稳定期叶片原生质体的产量非常低,活力也相对较低,分别仅有3.4×10~5个/g FW和89.5%、7.2×104个/g FW和80.6%。单因素实验结果表明,最适合变色期叶片原生质体分离的条件为:酶组合为2%纤维素酶+0.6%离析酶、酶解时间为6 h、甘露醇浓度为0.6 mol/L,此时橡胶树叶肉原生质体的产量可高达19.7×10~7个/g FW,活力约为97.6%。

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