科研产出
牛病毒性腹泻病毒玛纳斯株E2基因的克隆及其主要抗原表位区的分段表达
《中国兽医科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1～118)-(144～340)-(100～300)-(1～345),并将其克隆到pMD18-T Si mple载体中;将重组质粒pMD-(1～118)、pMD-(144～340)、pMD-(100～300)、pMD-(1～345)的HindⅢ+BamHI双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1～118)、pET-(144～340)、pET-(100～300)、pET-(1～345)。将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别。
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抗CP型、NCP型牛病毒性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：本研究采用致细胞病变(cytopathic,CP)型牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)标准毒和非致细胞病变(noncytopathic,NCP)型新疆优势毒株免疫产蛋鸡,用改良PEG法提取卵黄抗体(IgY),并对提取的IgY采用SDS-PAGE检测纯度,间接ELISA检测免疫后每隔7 d的抗体效价,并测定所得抗体对NCP型BVDV的中和效价。结果表明,用该法提取的IgY纯度较高;间接ELISA结果证明,经过4次免疫后,抗CP型BVDV的效价达到1∶32000,抗NCP型BVDV的效价达到1∶40000,3个月后再次检测,卵黄抗体效价未见明显下降。最后一次免疫14 d的抗体对NCP型BVDV的中和效价达到1×10-3。
关键词： 牛病毒性腹泻病毒 卵黄抗体 间接ELISA 非致细胞病变
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用SMART技术构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：利用SMART(switching mechanismat 5′end of RNA transcript)技术,采用Clontech公司的SMARTTMcDNALi-brary Construction Kit构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库。用Trizol Reagent提取总RNA,用Oligotex mRNA Kits分离mRNA,以逆转录酶PowerScriptTM合成第一链cDNA,通过LD-PCR合成并扩增双链cDNA;扩增产物经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、过SPIN-400TM柱去除小片段,连接到SfiⅠ消化过的pBluescriptⅡSK*质粒载体中,最后将重组质粒转化到E.coliDH5α内得到原始文库,扩增后,将文库保存于96孔细胞培养板中。经测定,构建的cDNA文库滴度为2.52×105PFU/mL;重组率为94.7%,插入片段长度多在0.5～3kb之间,平均长度约1.2kb。经5′端测序获得2642条有效序列,归并为1081条unigene。结果表明成功构建了扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库,获得了较丰富的扩展莫尼茨绦虫成虫表达基因,为筛选扩展莫尼茨绦虫的功能基因全长序列奠定了基础。
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绵羊生殖道抗菌肽
《生物化学与生物物理进展 》 2009 SCI 北大核心 CSCD
摘要：以屠宰场收集的新鲜、健康、雌性绵羊生殖器官为原材料.采用乙酸浸提、透析、Sephadex G-50凝胶过滤层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法分离纯化绵羊生殖道抗菌肽.以G+、G-和真菌为抗菌活性检测指示菌株,利用薄层琼脂糖孔穴扩散法、微量肉汤稀释法进行抗菌活性检测.对分离纯化所得纯品进行分子质量质谱测定、纯度鉴定、N端测序,并对其性质进行研究.结果表明:分离纯化所得两个绵羊生殖道抗菌肽分子质量分别为4820.47u和4012.5u,N端部分氨基酸序列分别为AYVLDEPKP和YDSGA.对G+细菌(S. aureus ATCC2592、Streptococcu ATCC55121)、G-细菌(E. coli ATCC25922)、真菌(C. albicans ATCC2002)均具有良好的抑菌活性.对家兔红细胞无溶血活性,对人血液凝固无影响.目前未见有从绵羊生殖道分离纯化得到抗菌肽的报道,并且这一研究结果进一步证实抗菌肽在多种动物生殖道天然免疫防御方面起着重要作用.
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滴灌条件下盐分对棉花养分及盐离子吸收的影响
《植物营养与肥料学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：在温室条件下,通过盆栽试验研究了滴灌条件下不同土壤盐度对棉花养分、盐离子吸收的影响。结果表明,棉花于物质生产受土壤盐分影响显著,高盐度条件下棉花生育进程滞后,生殖生长与营养生长不协调,造成脱落率增加,经济产量下降。土壤盐度显著影响棉花对N、P和K养分的吸收和分配;N、P和K的积累总量以及在子棉和铃壳中的吸收量随土壤盐度增加显著降低,而茎秆和叶片受影响较小。棉花植株体内的盐分离子(Ca~(2+)、Na~+与Cl~-)含量随土壤盐度的增加显著增加;吸收的盐分离子主要积累在茎叶,尤其以叶片中的盐分离子含量为最高,而子棉的盐分离子含量较少。
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黄瓜叶面积遗传及QTL定位分析
《中国蔬菜 》 2009 北大核心
摘要：选用2个叶面积大的黄瓜品种(D9320、D2005)和2个叶面积小的黄瓜品种(D0455、D0401)配制杂交组合,筛选叶面积差异较大的亲本组合D0401×D9320构建F2分离群体,采用加性-显性(AD)模型进行遗传分析。结果表明:黄瓜叶面积是由多基因控制的数量性状,以显性效应为主,存在一定的加性效应,狭义遗传力和广义遗传力较高。采用SSR分子标记构建遗传连锁图谱,利用复合区间法对黄瓜叶面积进行QTL定位。结果表明:CSWACC03、CSWCT05BZ和CSCTTT15a位于同一个连锁群上,连锁群总长度为68.3cM;检测出1个与黄瓜叶面积有关的QTL,与最近标记的距离为3.6cM,且变异贡献率为8.65%。
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捻转血矛线虫Hc38基因保守结构域所在片段的克隆及原核表达
《中国兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：参照捻转血矛线虫Hc38基因核酸序列(登录号:AY749124)的保守结构域设计1对引物,采用RT-PCR方法从绵羊捻转血矛线虫雌性成虫中扩增出约429 bp的cDNA序列,将其克隆到pMD19-T中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。与AY749124序列同源性为99%。进一步将克隆基因与原核表达载体pPRO EX HTa构建重组表达载体,经IPTG诱导,能在DH5a细菌中表达了相对分子质量约17 000的融合蛋白。经Western blot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与捻转血矛线虫阳性血清发生特异性反应。
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捻转血矛线虫Hc38基因DNA疫苗对绵羊免疫保护性效果评价
《中国预防兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了研究基因疫苗对绵羊的免疫保护效果,本研究构建了捻转血矛线虫(H.contortus)Hc38基因DNA疫苗。将H.contortus Hc38基因保守结构域克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,免疫鼠8d后用RT-PCR检测到该疫苗在鼠肌肉组织中进行了转录。将纯化的DNA疫苗免疫绵羊后,用western blot和ELISA方法检测疫苗在绵羊体内的翻译和诱导IgG的产生。二免后2周用10000条H.contortus第3期幼虫攻击实验动物,检测绵羊粪便虫卵排出、成虫数量等免疫保护性指标。该H.contortus Hc38 DNA疫苗与对照组比较,免疫组绵羊排出虫卵减少66.6%、成虫减少33.1%。特别值得注意的是免疫组的静脉注射方式产生抗体最高,相应羊的虫卵数和成虫数低。本实验证明Hc38基因DNA疫苗对绵羊虫卵及成虫发育具有明显的抑制作用。
关键词： 绵羊 捻转血矛线虫 Hc38 pcDNA3.1 DNA疫苗
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陕西引红济石工程深埋长隧洞涌水量预测
《辽宁工程技术大学学报(自然科学版) 》 2009 北大核心
摘要：针对陕西省引红济石调水工程施工中的隧洞涌水问题,在分析研究区水文地质条件的基础上,建立了研究区地下水非稳定流运动问题的三维渗流数学模型,进而根据勘察资料,采用三维有限差分方法建立了研究区三维水文地质数值模型,据此对拟选施工方案中各施工段的涌水量及其随施工进度的变化进行了预测。结果表明,隧洞的涌水量大小在不同的施工段是不相同的,引水隧洞总涌水量主要由通过断裂带时的涌水量组成。根据参数灵敏度分析结果,断裂带及各岩性段的渗透系数变化对隧洞的涌水量影响较大,当各渗透系数均取大值时,隧洞施工期总涌水量可增大一倍以上,各含水层储水参数变化对隧洞施工期涌水量影响小。
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渗流井取水方式地下水允许开采量计算
《水文地质工程地质 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：文章在分析渗流井井流特征的基础上,通过引入等效渗透系数,构建渗流井取水的"渗流—管流"耦合模型,建立了渗流井取水的数学模型,提出了渗流井取水计算模型。以陕西省悖牛川水源地为例,通过水文地质条件的分析,提出悖牛川陕西段河谷区地下水渗流井的开采方式。结合具体的水文地质结构及有关参数,采用地下水流三维有限差分法计算了各渗流井的出水量及其组成。在考虑河流持续断流45d的情况下,计算了断流条件下渗流井出水量的衰减过程,在此基础上,确定了悖牛川陕西段河谷区地下水渗流井开采方式新增允许开采量。
关键词： 渗流井 等效渗透系数 渗流—管流耦合模型 允许开采量
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