科研产出
以人结核杆菌hsp70为载体的“通用型”禽流感疫苗构建及免疫效力研究
《中国生物工程杂志 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：化学合成H5N1亚型禽流感病毒M2蛋白N端胞外域基因序列3拷贝基因(3M2e),与人结核杆菌hsp70蛋白基因融合,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建表达载体pET-3M2e与pET-3M2e-hsp70。重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导重组蛋白获得表达,通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白,利用Western blot鉴定重组蛋白免疫原性。将纯化的重组蛋白免疫20日龄的禽流感非免鸡,以人工合成的M2e与KLH偶联后免疫鸡作为阳性对照,以pET-32a(+)载体蛋白注射组作为阴性对照,初免后2周加强免疫。通过抗M2e抗体检测、细胞病变抑制试验与间接免疫荧光试验评价重组蛋白免疫后产生的体液免疫反应;利用流式细胞分群及细胞因子产量检测评价重组蛋白免疫后产生的细胞免疫反应。加强免疫后4周用100EID50的H9N2亚型AIV攻毒,通过Real-time PCR检测攻毒后3、5、7天免疫鸡泄殖腔棉拭子中病毒的含量。结果表明,重组蛋白3M2e hsp70免疫组能够刺激免疫鸡产生较高的抗体水平及细胞免疫应答,并且攻毒后泄殖腔棉拭子中病毒含量明显降低。
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赤豆杂交后代主要农艺性状的遗传规律研究
《江苏农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：本研究通过对9个赤豆品种配制的19个杂交组合的F2代每荚粒数、荚长、荚宽、粒长、粒宽、百粒重、粒色等农艺性状进行了研究分析,结果表明:赤豆F2代的每荚粒数、荚长、荚宽、粒长、粒宽等农艺性状大多介于父本与母本之间,但不同杂交组合的表现有所不同;不同颜色赤豆杂交结果分析表明,棕>黄>绿>红>鞍挂,黑>黄,红>深红,前一种颜色对后一种颜色为显性;正反交对赤豆杂交种皮颜色变化没有影响。
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面团配方及工艺条件对烧饼中丙烯酰胺形成的影响
《中国食品学报 》 2009 北大核心
摘要：研究了面团配方和工艺条件对烧饼中丙烯酰胺含量的影响。面团发酵的前0.5h,丙烯酰胺含量随发酵时间的延长而增加,即从60.2μg/kg增至95.4μg/kg;但随着时间的延长,丙烯酰胺含量呈缓慢下降趋势,发酵1h时丙烯酰胺含量降至88.5μg/kg;在面团中添加0～5%的蔗糖,烧饼中丙烯酰胺含量随蔗糖添加量的增加而增加,即从98.0μg/kg增至139.6μg/kg;在面团添加0～2%的食盐,烧饼中丙烯酰胺含量随食盐添加量的增加而减少,即从100.8μg/kg降至67.7μg/kg。烘烤温度-时间模式与烧饼中丙烯酰胺含量密切相关,210℃烘烤12min时丙烯酰胺含量为134.2μg/kg,而180℃烘烤20min时丙烯酰胺含量为90.8μg/kg。在面团中减少蔗糖添加量、增加食盐添加量,并在较低温度下适当延长烘烤时间,可以将烧饼中丙烯酰胺含量控制在较低的水平。
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大田条件下杂交稻光强广适应性的无损筛选
《江苏农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：对50份杂交稻组合在人工光氧化、遮阴处理和大田自然光照条件下抽穗期的叶片叶绿素含量、株高、叶质重和干物质重等生理指标分别进行测定与比较,以筛选不同杂交稻组合对高、低光强的广适应性。测试结果与相关分析表明,大田自然光照条件下生长的水稻在抽穗期剑叶的SPAD值分别与人工光氧化条件(高光强)下叶片叶绿素的含量以及人工遮阴条件(低光强,自然光强的4/5)下的干物质重呈显著相关。因此,可以将其作为大田条件下杂交稻对高、低光强广适应性的无损筛选指标,为水稻的广适应性育种提供了简易有效的方法。
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黑莓籽中原花青素的提取
《江苏农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用低浓度盐酸-香草醛法测定黑莓籽原花青素含量。通过单因素和正交试验对影响黑莓籽原花青素提取工艺的关键因子及其相互作用进行分析,优化得出的工艺参数为:乙醇浓度70%,料液比1∶6,提取温度60℃,提取时间80 min,pH值为4.5。在这种条件下,提取黑莓籽中原花青素得率为4.81%。
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无锡水蜜桃品种群遗传多样性及与其他群体亲缘关系的SSR分析
《植物遗传资源学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：无锡水蜜桃品种群体是典型的南方桃优势群体,为研究比较该群体的遗传多样性,以41个无锡水蜜桃品种和91个其他桃品种为试材,利用25对位于不同连锁群上的SSR引物评价群体特征,并分析了群体内外的亲缘关系。群体遗传多样性比较结果表明:无锡水蜜桃具有较高的多态性位点百分率(71.74%),仅次于华北品种群(74.64%);该品种群体具有中等程度的遗传多样性,Nei′s遗传多样性指数(He)和Shannon信息指数(H0)分别为0.2068和0.3165,两个指数值均不及华北、西南、华南以及西方国家群体。群体内聚类结果表明:无锡水蜜桃群体内并不存在明显的遗传分化,但在相似系数为0.83时,无锡水蜜桃的主栽品种聚于同一组。群体间聚类结果表明:无锡水蜜桃与上海水蜜桃群体间亲缘关系最近,相似系数为0.994,其次是日本桃群体(0.985)和浙江桃群体(0.971),这4个类群在聚类图中较早的聚为一类,这与无锡水蜜桃的地理起源和演化相符。
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中国北纬33度地区小麦纹枯病菌的群体组成及致病力研究
《麦类作物学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为明确中国北纬33度地区小麦纹枯病病原菌的组成和致病力,对分离自江苏、安徽、河南、湖北4省的157株丝核菌,通过Hoechst 33258荧光染色法进行细胞核数量观测,利用菌丝融合的方法测定其所属融合群,并测定了其中111株丝核菌株对3个小麦品种(CI12633、陕229、扬麦158)麦苗的致病力。结果表明,在供试菌株中,150株为双核丝核菌,占95.54%,都属于AG-D融合群;7株为多核丝核菌,占4.46%,其中3株属于AG-1-IB融合群,3株属于AG11融合群,1株属于AG5融合群。供试菌株的致病力存在明显差异,双核丝核菌的致病力显著高于多核丝核菌,AG-D融合群中两种不同融合频率的菌株致病力无明显差异。不同地区的菌株间致病力无明显差异,菌株对3个小麦品种的致病力有显著差异,对CI12633致病力最强,对陕229致病力最弱,对扬麦158的致病力居中。
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转基因高油酸甘蓝型油菜新种质的获得
《江苏农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：在获得转fad2基因ihpRNA的甘蓝型油菜的基础上,应用气相色谱技术分析了转基因株系W-4(T_1代)单株自交种子(T_2代)的脂肪酸组成。结果显示:由49个单株组成的T_2代群体油酸(C_(18:1))含量变幅为55.87%～84.73%,其中有19个(占38.8%)单株种子油酸含量大于75%,有11个(占22.4%)单株种子油酸含量大于80%;受体(对照)的油酸含量变幅为55.28%～67.43%;获得的转基因高油酸材料(油酸含量≥75%)种子中亚油酸(C_(18:3))和亚麻酸(C_(18:3))含量明显低于受体;高油酸材料的油酸脱饱和指数ODP值为5%～12%,而受体的ODP值高达20%～36%。基于ODP值,可以推测转基因高油酸材料种子中的FAD2活性受到有效抑制,从而阻止了油酸向亚油酸、亚麻酸的合成。
关键词： 高油酸种质 转基因油菜 △-12脱饱和酶基因
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禽流感病毒M2、NP融合蛋白与多种佐剂的联合运用及对免疫原性影响
《中国生物工程杂志 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：以禽流感病毒保守的基质蛋白2胞外区(M2e)基因与核蛋白的两个T细胞表位(NP1、NP2)基因为基础构建原核表达载体pET-3M2e-NP1-NP2。利用IPTG诱导,目的蛋白以可溶性形式获得高效表达,Western blot分析表明重组蛋白能够与抗AIV M2e蛋白的抗体发生反应。将纯化的融合蛋白分别与弗氏佐剂、白油、壳聚糖3种佐剂进行混合以及适量诱导后的菌体与白油混合制成疫苗,肌肉注射免疫20日龄非免鸡,首免3周后加强免疫一次。免疫后每周定期采血,用ELISA方法检测抗M2e抗体水平;并在MDCK细胞上检测血清与病毒的结合能力;在鸡胚上检测血清的中和能力;利用流式细胞计数技术测定CD4+、CD8+T淋巴细胞数量的变化。结果表明,原核表达的融合蛋白能够刺激机体产生免疫反应,抗血清能够跟H9N2亚型禽流感病毒特异性结合,血清不能中和病毒但在低病毒含量感染时候抑制病毒的复制。流式细胞仪检测显示外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞数量在免疫后明显升高(P<0.05),具有细胞免疫的特征。佐剂对于免疫反应影响明显,其中弗氏佐剂组产生抗体最高,白油佐剂组次之,壳聚糖组抗体水平最低,菌体白油组产生抗体水平与白油佐剂组相当但维持时间较长。构建的融合蛋白可用于禽流感的预防,而选择高效的佐剂增强亚单位苗的免疫效果也是目前急需解决的问题。
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