科研产出
香蕉CRISPR/Cas9基因编辑技术体系的建立
《中国农业科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立香蕉CRISPR/Cas9基因编辑技术体系,为在香蕉上利用CRISPR/CAS9技术开展香蕉基因功能研究和香蕉育种工作开辟新的路径。【方法】根据香蕉A基因组八氢番茄红素脱氢酶(phytoene dehydrogenase,PDS)基因组序列,利用在线工具ZiFiT Targeter Version 4.2确定合适的CRISPR/Cas9靶标序列,选择其中一个位点作为靶标位点,设计包含靶标基因MaPDS序列的sgRNA。利用一套改良的CRISPR/Cas9多靶点载体系统,以pYLg RNA-Lac Z-U6a质粒为模版,Overlapping PCR法构建U6a-sgRNA表达盒,再利用Golden Gate Cloning法将U6a-sgRNA表达盒克隆到pYLCRISPR/Cas9载体中,构建以MaPDS为靶标基因的pYLCRISPR/Cas9-sgRNA载体。构建的质粒含Cas9p和sgRNA表达盒,其中Cas9p由P_(Ubi)启动子驱动,sgRNA由水稻来源的RNA启动子U6a驱动。将构建好的载体转入农杆菌EHA105,转化香蕉主栽品种巴西蕉胚性细胞悬浮系,获得抗性再生植株。设计PCR引物扩增包含靶标序列的MaPDS序列片段,检测和分析再生植株MaPDS被编辑的情况。【结果】试验选择MaPDS作为CRISPR/Cas9靶标基因,设计一个靶标位点,利用Overlapping PCR法获得了U6a-sgRNA表达盒,利用Golden Gate Cloning法将其克隆到pYLCRISPR/Cas9的Bsa I位点,成功构建了针对MaPDS的pYLCRISPR/Cas9-sgRNA载体。经过农杆菌浸染、抗性筛选、抗性胚诱导、萌发及生根,最终获得抗性独立转化株系129个。其中,71个株系出现白化表型,产生白化表型的几率达55%。失绿突变体的出现意味着MaPDS蛋白功能丧失。随机取转化株系中的白化表型株系33个和正常表型株系14个,提取其叶片基因组DNA,扩增含有MaPDS的靶位点片段,序列分析结果表明,白化表型株系的MaPDS靶位点序列发生了基因编辑。主要是在靶位点附近增加1个碱基T或A,或是在靶位点附近或下游发生碱基颠换或转换,出现非靶标位点突变。这些突变形式均能导致MaPDS蛋白翻译错误,从而使MaPDS蛋白丧失功能,表现为白化。转化株系中表型正常植株的MaPDS靶位点序列与野生型一致,未检测到变异。【结论】成功在香蕉体内实现了对内源MaPDS的定点敲除,获得了基因定点敲除的突变体株系,为进一步利用基因编辑技术在香蕉上的应用奠定了基础。
关键词： 香蕉 CRISPR/Cas9 MaPDS 基因编辑
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长脖黄×大叶密合重组自交系群体主要农艺性状遗传分析
《中国烟草科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：了解烟草重要农艺性状的遗传变异可为烟草育种提供基础。本研究利用烟草品种"大叶密合"和"长脖黄"作亲本建立的重组自交系RILs(F6)群体为材料,对株高、节距、叶片数、最大叶叶宽、最大叶叶长、最大叶叶重和茎围等7个农艺性状进行方差分析、相关性分析、遗传力以及遗传模型分析。结果表明,7个性状在重组自交系群体中连续变异,变异范围在10.8%~25.6%,存在双向超亲分离现象,除了最大叶叶长外,都符合正态分布。由各性状之间相关分析得出,21对性状中18对达到显著或极显著水平,且均是正相关,其中有4对性状的相关系数大于0.5。7个性状的广义遗传力依次为:茎围>最大叶叶宽>节距>株高>叶片数>最大叶叶重>最大叶叶长,同时具有较高的相对遗传进度。主基因+多基因混合遗传模型分析表明,叶片数、最大叶叶宽和最大叶叶长分别符合2对隐性上位主基因遗传模型、3对独立完全等加性主基因遗传模型和4对加性上位主基因遗传模型。株高、节距、最大叶叶重和茎围等4个性状均受2对主基因+多基因控制,其中株高和最大叶叶重的主基因作用方式都为抑制作用,而节距和茎围都为显性上位。研究说明基于永久性的重组自交系群体,可解析重要农艺性状的遗传变异规律,为烟草育种提供理论基础。
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龙眼果肉提取物改善SAMP8小鼠学习记忆功能
《现代食品科技 》 2017 北大核心
摘要：探讨龙眼果肉醇提物的石油醚相(LP)和水相(LW)对小鼠学习记忆功能的改善效果及作用机制。以SAMP8小鼠为老年痴呆模型,采用Morris水迷宫观察小鼠的学习记忆能力;检测小鼠血清中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;Western blot法检测小鼠脑组织中β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)等相关蛋白(淀粉样前体蛋白(APP)、β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1))的表达水平。研究发现,与模型组相比,LP和LW能显著改善痴呆小鼠的学习记忆功能,分别不同程度地降低其血清中NO和MDA含量以及脑组织中Aβ1-42、APP和BACE1的蛋白表达,提高其血清中SOD和GSH-Px活力。以上结果表明LP和LW可能通过提高小鼠机体的抗氧化能力和抑制其脑组织中Aβ等相关蛋白的表达的共同作用来改善痴呆小鼠的学习记忆功能,具有预防老年痴呆症的潜在功效。
关键词： 龙眼果肉 老年痴呆 学习记忆功能 抗氧化 β-淀粉样蛋白
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蝴蝶兰丛生芽组织培养研究进展
《广东农业科学 》 2017
摘要：蝴蝶兰市场前景广阔,采用组织培养快速繁殖种苗是规模化生产及推广应用的唯一手段,综述了蝴蝶兰丛生芽组织培养研究进展,旨在为蝴蝶兰种苗规模化生产提供依据。以花梗第2节或第3节为外植体,用0.1%氯化汞消毒8~15 min比次氯酸钠效果好;以1/2MS或花宝一号为基本培养基,使用6-BA或6-BA和NAA相搭配可诱导出丛生芽;以MS或花宝一号为基本培养基,6-BA或TDZ并配合NAA适宜的浓度,对丛生芽增殖效果明显;以低浓度的NAA或IBA,并配以椰子汁或香蕉汁、土豆汁等有机物对壮苗生根有较好的促进作用;活性炭能显著抑制褐化且对褐化的影响最大,转接周期对褐化的影响次之。
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荔枝密闭园和间伐园主要病害发生情况比较
《植物保护 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：回缩间伐是荔枝密闭园改造的一个有效措施,但改造后的病害发生情况尚未见有报道。为给荔枝密闭园改造提供病害防控方面的理论依据,本研究分别于荔枝花穗期、小果期、果实成熟期和冬梢期,在国家荔枝龙眼产业技术体系荔枝密闭园改造示范园,对4个荔枝品种于密闭园和间伐园发生的主要病害种类、病害危害程度进行了两年的调查。调查数据统计分析结果显示,间伐园与密闭园所发生的主要病害在种类上无差异,但各物候期间伐园的平均总病叶率、果实成熟期的平均总病果率均低于密闭园,其中3个品种的差异达到显著水平;从花穗期至果实成熟期,密闭园和间伐园的病害危害程度均逐渐升高,在果实成熟期达到最高峰,进入冬梢期时又有所下降;调查还表明对密闭园进行回缩间伐改造有利于荔枝病害管理,改造后果园的病害防治重点时期为花穗期至果实成熟期。
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檀香吸器维管组织的个体发育
《热带亚热带植物学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了解檀香吸器维管组织的发育过程,采用激光共聚焦显微镜、光学显微镜和透射电镜观察檀香吸器维管组织的个体发育。结果表明,檀香维管组织的分化分为两个时期:入侵前和入侵后。吸器维管组织发育始于盘状吸器时期,起源于吸器基部具有分生能力的细胞,后分为两束。侵入前无向顶的分化,处于吸器基部。侵入后随吸管深入寄主根与寄主根维管束连通,形成具有吸收功能的维管组织。成熟吸器维管组织呈倒烧瓶结构,仅处于吸器烧瓶核心两边,由木质部组成而无韧皮部。檀香的吸器维管组织发育有两个因素诱导,一个是遗传因素,另一个为寄主。这些为檀香半寄生性特性研究提供了形态解剖学基础。
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新型复配药剂烯酰·唑嘧菌对辣椒疫病的防治效果
《长江蔬菜 》 2017
摘要：为评价复配药剂47%烯酰·唑嘧菌悬浮剂防治辣椒疫病的效果及其对辣椒的安全性,为该药剂的推广应用提供依据,连续2 a进行了47%烯酰·唑嘧菌悬浮剂防治辣椒疫病的田间药效试验。试验结果表明,喷施47%烯酰·唑嘧菌悬浮剂有效成分用量352.5、423.0、493.5、564.0 g/hm~2对辣椒疫病有较好的防治效果,施药3次后15 d调查,平均防效2013年分别为69.56%、72.69%、82.02%和84.82%,2014年分别为68.22%、71.03%、83.13%和88.57%,该药剂值得在生产上推广应用。
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白羽肉鸡和黄羽肉鸡对豆粕表观回肠氨基酸消化率比较研究
《广东饲料 》 2017
摘要：研究旨在研究比较白羽肉鸡和黄羽肉鸡对豆粕中14种氨基酸表观回肠消化率(AID)的异同。选用35日龄AA肉仔鸡、岭南黄和广西黄肉鸡各72只,随机分为6个处理,第1组:AA鸡饲喂基础日粮,第2组:AA鸡饲喂70%基础日粮+30%豆粕,第3组:岭南黄鸡饲喂基础日粮,第4组:岭南黄鸡饲喂70%基础日粮+30%豆粕,第5组:广西黄鸡饲喂基础日粮,第6组:广西黄鸡饲喂70%基础日粮+30%豆粕。每个处理6个重复,每个重复6只鸡。基础日粮为玉米-豆粕型日粮。采用TiO_2作外源指示剂,运用联立方程组法测定豆粕氨基酸表观回肠消化率。结果表明:AA鸡和岭南黄鸡对豆粕的表观回肠氨基酸消化率差异不显著(P>0.05);而广西黄鸡对豆粕的赖氨酸表观回肠消化率显著高于AA鸡(P<0.05),而与岭南黄鸡差异不显著(P>0.05);广西黄鸡对豆粕的苏氨酸、亮氨酸、甘氨酸和谷氨酸的表观回肠消化率显著高于AA鸡和岭南黄鸡(P<0.05);广西黄鸡对豆粕丙氨酸表观回肠消化率显著低于AA鸡和岭南黄鸡(P<0.05)。综上所述,慢速型黄羽肉鸡和AA肉鸡在豆粕表观回肠消化率上有差异,而快速型黄羽肉鸡在豆粕的表观回肠消化率上没有差异。
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茶树水分胁迫建模及试验
《排灌机械工程学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：通过观测冬季和春季塑料大棚中不同灌溉条件下茶树的冠层温度、空气温湿度、土壤热流密度、土壤湿度、太阳净辐射照度及风速等因素,利用Idso经验模式确定了冠气温差的下限方程.通过观察不同水分处理条件下茶树作物水分胁迫指数的日变化和季节变化,得出了反映茶树水分状况的关系曲线.研究分析了Jackson的理论模式与Idso的经验模式反映茶树水分胁迫的差异性,针对华南地区经常出现的冬旱及春旱,首先通过人工田间数据采集的方法,分9—12月和1—3月2个阶段测量茶树作物水分胁迫指数中所涉及的各个参数,建立了茶树冬季和春季的作物水分胁迫指数模型.研究结果发现,茶树冬季和春季作物水分胁迫指数模型相差不大,冬季经验模型中,系数A和B的值分别为1.265和-0.220,而春季经验模型中,系数A和B的值分别是1.230和-0.214,这可能与茶树属于多年生植物,冬季和春季叶面积指数等变化不大相关.
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高效液相色谱测定诺丽果实中有机酸含量的方法
《热带农业工程 》 2017
摘要：采用高效液相色谱法测定诺丽果实中草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸和柠檬酸的含量。样品用磷酸二氢钾+磷酸水溶液经超声波提取,用SinoChrom ODS-BP色谱柱分离,流动相为磷酸二氢钾+磷酸溶液pH2.8,流速0.6 m L/mi n。在该条件下中草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸和柠檬酸得到很好的分离,分别在1.0-2.5、1.0-2.5、1.5-2.5和1.0-2.5μg的范围内有良好的线性范围,相关系数R~2分别为0.999 0、1.000 0、0.999 9、0.999 9和1.000 0,最低检出限分别为1.0、2.0、2.5、1.5和3 mg/kg,加标回收率分别为101.3%、98.7%、97.3%、98.3%和97.5%。该方法快速、准确,能用于测定诺丽果实中有机酸的含量。
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