科研产出
巴西橡胶树WRKY转录因子基因HbWRKY41的克隆与表达分析
《华北农学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为阐明巴西橡胶树WRKY转录因子基因Hb WRKY41的分子特征及表达特性,利用RT-PCR方法从巴西橡胶树中克隆了该基因。Hb WRKY41开放阅读框1 020 bp,编码339个氨基酸,预测蛋白分子量为38.48 k Da,理论等电点为5.52。Hb WRKY41含有1个WRKY保守结构域和1个C_2HC型锌指结构,与蓖麻、棉花、大豆及拟南芥WRKY41蛋白聚为一类,属于Ⅲ类WRKY转录因子家族成员。实时荧光定量PCR检测结果表明,Hb WRKY41在巴西橡胶树根、树皮、胶乳、叶和花等组织中均有表达,以在衰老叶片中的表达最高,而在胶乳和树皮中的表达相对较低。干旱、低温及高盐胁迫均可上调Hb WRKY41的表达,其中以低温或盐胁迫下Hb WRKY41的表达持续升高。Hb WRKY41可能在巴西橡胶树叶片衰老和非生物胁迫应答中起着重要调控作用。
关键词： 巴西橡胶树 WRKY转录因子 基因克隆 表达分析 非生物胁迫
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水中壬基酚残留检测方法的研究及其应用
《江苏农业科学 》 2017 北大核心
摘要：建立了固相萃取-高效液相色谱和浊点萃取-高效液相色谱2种方法检测水溶液中壬基酚,分析了2种方法对水溶液中壬基酚回收率的影响。固相萃取以C18小柱作为固相萃取小柱,5 m L甲醇作为洗脱液进行固相萃取,后经HPLC检测,回收率可以达到80.28%82.38%,相对标准偏差为0.40%4.57%,检出限为0.9μg/L。浊点萃取以非离子表面活性剂聚乙二醇-6000(PEG-6000)作为萃取剂,在33 g/L的PEG-6000,溶液p H值为2.0,160 g/L Na2SO4,45℃水浴15 min条件下进行浊点萃取,用HPLC检测。壬基酚的质量浓度在0.022.0 mg/L时,其质量浓度与HPLC检测峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 4,检出限为0.4μg/L;壬基酚的萃取率为84.97%-101.64%,相对标准偏差为0.03%4.40%,符合有机污染物检出方法要求。通过斑马鱼急性毒性试验,检测水中壬基酚含量,证明浊点萃取-高效液相色谱法用于检测水中壬基酚残留的方法可行。对比固相萃取,浊点萃取更具发展前景。
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解磷菌株M-3-01发酵工艺优化
《河南科技学院学报(自然科学版) 》 2017
摘要：采用单因素试验研究碳、氮、磷矿粉3组主要影响因子类别和质量浓度对解磷菌M-3-01(Serratia nematodiphila)菌株解磷效果的影响,再运用正交试验进行L9(34)优化,以探究M-3-01的解磷发酵配方工艺.结果表明:菌株M-3-01的高效解磷最终优化发酵配方中,葡萄糖、草酸铵、磷矿粉、无机盐的质量浓度分别为15 g/L、1.5g/L、2.5 g/L、1.92 g/L,接种量为2%,pH为6.0,150 r/min,37℃.解磷菌发酵配方经过优化后,优化组有效磷含量达88.64 mg/L,是CK有效磷含量的2.34倍,效果显著,为优化后的解磷菌发酵配方投入到微生物菌肥产业化生产提供了有力的数据支持.
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科研实验室仪器管理存在的问题与对策
《设备管理与维修 》 2017
摘要：随着实验室建设的发展以及设备购置经费投入的逐渐增加,如何管理好仪器设备,将其使用效益完全发挥出来,已成为实验室仪器设备管理部门需要解决的首要问题。结合工作实际探讨实验室仪器管理存在的问题,并给出解决对策与方法。
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氯化钠胁迫下模式植物狗尾草种子萌发期抗盐性鉴定与评价指标研究
《热带作物学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：狗尾草是比拟南芥更贴近主要农作物的模式植物,本研究在狗尾草高效遗传转化技术的基础上,以适宜转化的狗尾草ME34品系成熟种子为外植体,根据氯化钠高渗培养基培养法,选择1/2 MS和MS两种基本培养基,分别设计了0、100、200、300、400、500 mmol/L 6个梯度,对狗尾草ME34品系种子萌发期的抗盐性进行了鉴定。实验对各梯度种子萌发率、芽长、根长、鲜重等生长指标进行了测定和统计分析。结果表明:在同一氯化钠梯度下MS基本培养基比1/2 MS基本培养基对狗尾草生长的盐害程度有加重趋势,1/2 MS的基本培养基更能反应狗尾草种子本身对氯化钠的耐盐反应;氯化钠100~200 mmol/L梯度是鉴定狗尾草ME34品系抗盐性的关键梯度,种子萌发期发芽率、鲜重、根长、芽长各项生长指标都受到显著或极显著的影响,4个参数间都极显著正相关;其中鲜重和芽长对氯化钠的胁迫最敏感和直接,可作为该品系种子萌发期抗盐性鉴定的一级指标;种子发芽率对氯化钠胁迫的敏感性仅次于鲜重和芽长,可作为该品系种子萌发期抗盐性鉴定的二级指标;根长对氯化钠胁迫的敏感性稍弱,可作为该品系种子萌发期抗盐性鉴定的三级指标。实验为狗尾草作为抗盐模式植物的研究准备了抗盐性评价指标基础,无论是外源抗盐基因在狗尾草内的过表达,还是内源抗盐基因的敲除,都需要这些具体评价指标的支持。
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木薯钙/CaM调控类受体激酶基因MeCRLK1的克隆及生物信息学分析
《基因组学与应用生物学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：木薯作为热带亚热带植物对低温非常敏感。为研究木薯对低温敏感的分子机制,我们从低温信号传导途径中的感知方面展开研究。植物类受体激酶作为信号传导途径中的信号接收器,在植物响应低温信号刺激过程中起重要作用。因此本研究利用RT-PCR从木薯栽培种SC8中克隆了一个钙/钙调素调控类受体激酶基因,命名为Me CRLK1(Gen Bank Accession No.KP256022)并进行了系统的生物信息学分析。研究结果表明该基因CDS区为1 296 bp,编码一个431 aa的蛋白。该蛋白的分子式为C_(2118)H_(3391)N_(605)O_(636)S_(18),分子量约为48.08 k D,理论等电点为8.11。该蛋白预测具有多个不同的磷酸化位点,3个Ca M结合位点,4个紊乱区和1个球蛋白区。蛋白结构分析表明该蛋白具有一个跨膜区,一个S_TKc结构域,N末端没有信号肽。预测此蛋白可能亚细胞定位于膜上。Me CRLK1和At CRLK1蛋白序列分析表明,它们的相似性为79.8%,序列一致性为77.6%。二者序列的差异主要位于C末端。该研究结果为进一步验证Me CRLK1基因的功能奠定了基础。
关键词： 木薯钙 钙调素调控类受体激酶 基因克隆
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狗尾草胚性愈伤高效农杆菌转化体系的建立
《热带作物学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：狗尾草是研究C4光合作用的优秀模型,具有热带植物的典型特征,也可作为研究热带作物的重要模型,高效的转基因技术是模式植物广泛服务于科研的基础,目前狗尾草作为模式植物的研究在国外越来越热门,但在国内还没有被关注。但作为模式植物狗尾草现有的转化技术还不完善,转化周期有待缩短,转化效率需要进一步提高。本研究以狗尾草ME34品系不同阶段胚性愈伤为外植体进行农杆菌转化体系研究,通过实验大大提高了狗尾草的转化效率,缩短了转化周期,为狗尾草转基因研究提供了新的技术方法,新方法主要包括以下技术环节:高效胚性愈伤诱导技术,受体胚性愈伤的选择,适宜转化的农杆菌株系及培养条件,浸染和共培养条件与方法,抗性愈伤筛选条件,抗性愈伤成苗条件等。
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野生沉香的鉴别方法
《林业科学 》 2017 EI 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立有效、准确、科学的野生沉香鉴别技术,为沉香的鉴定和品质评价体系建立提供参考依据。【方法】采用醇溶性浸出物含量、显色反应、薄层色谱分析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)方法,对10批次野生沉香进行鉴别。【结果】10批次野生沉香的醇溶性浸出物含量整体较高,明显大于《中华人民共和国药典》(2015年版)规定的10.0%;野生沉香的显色反应除呈现人工沉香的樱红色或浅樱红外,还出现紫堇色、浅红色和浅紫色在内的多样性显色,可辅助鉴别野生沉香;薄层色谱操作简单,节省材料,且野生沉香样品在薄层鉴别中呈现清晰的荧光斑点和较好的分离效果,对于大部分野生沉香样品可通过薄层色谱进行基础鉴别;通过相似度评价、峰面积比较,建立10批次野生沉香的HPLC指纹图谱,并确定9个野生沉香共有特征峰,确定野生和人工沉香HPLC特征指纹图谱的差异性。【结论】基于各方法的优势及精准程度,本文提出在显微鉴别的基础上,通过醇溶性浸出物含量、显色反应、薄层色谱分析和HPLC的指纹图谱及特征峰鉴别野生沉香,可为沉香品质评价体系建立提供参考。
关键词： 野生沉香 鉴别方法 高效液相色谱 指纹图谱 共有特征峰
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淀粉磷酸化酶原核表达及单克隆抗体的制备
《中国农学通报 》 2017
摘要：旨在体外表达淀粉磷酸化酶,免疫小鼠制备单克隆抗体。用PCR扩增木薯淀粉磷酸化酶基因,将其克隆到原核表达载体(pET28a)中,经E.coli表达纯化淀粉磷酸化酶。用纯化的淀粉磷酸化酶蛋白免疫Babl/c小鼠,间接ELISA测定小鼠血清效价,取小鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞融合,制备能产生抗淀粉磷酸化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并检测其亚型和抗体稳定性。重组质粒在E.coli中能高效表达淀粉磷酸化酶,免疫小鼠后取效价高的3#小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合,共获得15株抗体效价均达到10~5以上,能稳定分泌抗淀粉磷酸化酶抗体的细胞株,与钙调蛋白、牛血清白蛋白无交叉反应,抗体亚型鉴定其中13株为IgG型抗体,其中2株抗体性能非常稳定。本实验制备的淀粉磷酸化酶单克隆抗体效价高、特异性强、稳定性好,为后续木薯中淀粉磷酸化酶研究奠定基础。
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