文献类型: 中文期刊
作者: 余厚美 1 ; 安飞飞 1 ; 罗秀芹 1 ; 陈松笔 1 ; 欧文军 1 ;
作者机构: 1.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部木薯种质资源保护与利用重点实验室
关键词: 木薯;淀粉磷酸化酶;蛋白表达;单克隆抗体
期刊名称: 中国农学通报
ISSN: 1000-6850
年卷期: 2017 年 33 卷 14 期
页码: 28-32
摘要: 旨在体外表达淀粉磷酸化酶,免疫小鼠制备单克隆抗体。用PCR扩增木薯淀粉磷酸化酶基因,将其克隆到原核表达载体(pET28a)中,经E.coli表达纯化淀粉磷酸化酶。用纯化的淀粉磷酸化酶蛋白免疫Babl/c小鼠,间接ELISA测定小鼠血清效价,取小鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞融合,制备能产生抗淀粉磷酸化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并检测其亚型和抗体稳定性。重组质粒在E.coli中能高效表达淀粉磷酸化酶,免疫小鼠后取效价高的3#小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合,共获得15株抗体效价均达到10~5以上,能稳定分泌抗淀粉磷酸化酶抗体的细胞株,与钙调蛋白、牛血清白蛋白无交叉反应,抗体亚型鉴定其中13株为IgG型抗体,其中2株抗体性能非常稳定。本实验制备的淀粉磷酸化酶单克隆抗体效价高、特异性强、稳定性好,为后续木薯中淀粉磷酸化酶研究奠定基础。
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