石斑鱼神经坏死病毒RNA干扰的转染条件优化与效果分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄桂菊

作者： 黄桂菊;喻达辉;柳明;潘俐玲;王晓宁

作者机构：

关键词： 石斑鱼;神经坏死病毒;衣壳蛋白基因;RNA干扰

期刊名称： 华南农业大学学报

ISSN： 1001-411X

年卷期： 2011 年 32 卷 02 期

页码： 99-104

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 克隆了石斑鱼神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)的衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列并构建了绿色荧光蛋白(EGFP)基因与MCP基因的融合真核表达载体pEGFP-MCP,设计了3对针对MCP基因序列的小片段干扰性RNA(Small interfering RNA,siRNA)序列(NNV-001、NNV-002、NNV-003),开展了转染方法、转染剂量与转染效果的研究,用脂质体转染法将pEGFP-MCP和不同剂量的siRNA共转染导入黑头呆鱼肌肉(FHM)细胞.结果表明,用无血清培养基转染、4~6 h后换液的转染方法,比不换液、只将转染混合物代替同体积培养基的转染方法效率高;当质粒的转染量为50、70、100和150 ng时,100 ng的转染量为最合适;在pEGFP-MCP与siRNA共转染组,3对siRNA序列都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中NNV-002效果最好.当siRNA终浓度为200 nmol/L时,显示出了较好的沉默效果.

分类号： S943

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