具有免疫反应活性的猪源重组抗体的原核表达及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 沈旦枫

作者： 沈旦枫;王睿;郭佃磊;霍琳琳;刘永刚;郭龙军;王玉娥;李曦

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒;原核表达;猪源化重组抗体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2017 年 39 卷 03 期

页码： 220-224

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA中扩增出编码抗体重链可变区(VH)基因序列和轻链可变区(VL)基因序列,将扩增的可变区基因序列分别与本实验室前期克隆的猪源抗体轻链恒定区(CL)和重链恒定区(CH)基因序列连接后,以Linker序列将轻链和重链全长基因序列相连,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L)。将该基因克隆于原核表达载体p ET-28a中进行原核表达及纯化。Western blot鉴定结果显示,表达的重组蛋白能够被抗猪IgG抗体所识别,表明表达的重组蛋白为PrAb;经PRRSV包被的ELISA鉴定,PrAb与PRRSV弱毒株CH1R和强毒株HuN4呈阳性反应,表明所制备的PrAb为PRRSV特异性抗体。本实验为进一步制备诊断PRRS的猪源化重组抗体奠定了基础。

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒ORF5基因的克隆与表达. 田小辉,王爱萍,乔松林,张改平,肖治军,冯丽丽,刘运超,李乔木,李卓阳. 2009

[2]猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒非结构蛋白nsp1α的表达及活性检测. 司朝朝,史西保,李恭贺,乔松林,王丽,李青梅,王超,陈静,王寅彪,张改平. 2015

[3]猪FcγRⅢ双抗体夹心ELISA方法的建立及其在PRRSV感染猪中的初步应用. 谷伟红,郭龙军,牛军伟,田志军,冯力,王玉娥. 2016

[4]变异猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测方法的建立. 王隆柏,庄向生,车勇良,魏宏,陈如敬,周伦江. 2010

[5]猪caspase-1p20多克隆抗体制备及其在猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染中的初步应用. 刘园园,李江南,刘琴芳,张枫,张利杰,黄丽,穆杨,翁长江. 2014

[6]江苏省4种引致猪繁殖障碍的病毒病流行病学调查. 何家惠,侯继波,王继春,张敬友,徐筠遐,刘冬霞,诸长贵,王伟峰,刘跃兴,杨瑛. 2000

[7]PRRSV强弱病毒株嵌合感染性克隆的构建及鉴定. 吕健,韦祖樟,高飞,郑海红,童光志,袁世山. 2013

[8]猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA刺激下NLRP3与DDX19A共定位的研究. 王胜男,刘园园,胡亮,李江南,翁长江. 2016

[9]猪FcγRIII双抗体夹心ELISA方法的建立及其在PRRSV感染猪中的初步应用. 谷伟红,王玉娥. 2015

[10]非结构蛋白2高变区在PRRSV复制中的作用. 吕健,韦祖樟,高飞,郑海红,童光志. 2012

[11]猪caspase-1 p20多克隆抗体制备及其在猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染中的初步应用. 刘园园,李江南,刘琴芳,张枫,张利杰,黄丽,穆杨,翁长江. 2014

[12]4株高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离与鉴定. 李贺侠,刘茂军,甘源,张理航,孙佩元,张宁,吴叙苏,邵国青. 2008

[13]小麦TaPDK基因的序列分析、原核表达及纯化. 杨书玲,张龙雨,张改生,桑青,刘红占,朱启迪,张新钵,赵新亮. 2013

[14]桑树多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因MaPGIP1的克隆及功能分析. 王晓红,朱攀攀,梁燕梅,韩淑梅,赵爱春,王传宏,鲁成,余茂德. 2015

[15]中国对虾Rab7全长cDNA的克隆及原核表达. 卢金凤,梁高峰,梁艳,黄倢. 2012

[16]水稻瘤矮病毒S9基因的生物信息学分析及原核表达蛋白的抗血清制备. 赵芹,邓永枢,阮小蕾,李华平. 2010

[17]猪流行性腹泻病毒N蛋白的原核表达及生物学活性鉴定. 陈如敬,吴学敏,车勇良,王隆柏,魏宏,庄向生,刘玉涛,严山,周伦江. 2013

[18]凡纳滨对虾造血激素基因全长序列分析及其克隆与表达. 梁高峰,梁艳,成君军,张士璀,黄倢. 2012

[19]烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析. 欧阳浩淼,黄日波,陈东,金城. 2013

[20]黑曲霉果胶裂解酶基因的克隆与原核表达. 谢茂芳,薛保国,吴坤. 2013

作者其他论文 更多>>

微信小程序