胞内劳森氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王丹丹

作者： 王丹丹;周俊明;倪艳秀;祝昊丹;朱雪蛟;周金柱;李彬

作者机构：

关键词： 胞内劳森氏菌;间接ELISA;抗体检测;LI1022重组蛋白

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 004 期

页码： 396-401,444

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立胞内劳森氏菌(LI)抗体的间接ELISA检测方法,本研究构建了含有LI外膜蛋白基因的重组质粒pET32-LI1022并进行原核表达.结果显示LI1022基因在BL21(DE3)宿主菌内以可溶性表达重组LI1022蛋白(rLI1022),western blot结果显示rLI1022具有较好的反应原性,可作为建立间接ELISA检测方法的包被抗原.进一步经Ni柱纯化获得纯化rLI1102,以其为包被抗原,对ELISA条件进行优化,结果显示纯化的rLI1022以4.69 ng/孔4℃过夜包被最佳;血清最佳反应条件为1∶100稀释,37℃作用1h;羊抗猪IgG-HRP最佳反应条件为1∶10 000稀释,37℃作用1h;25℃TMB底物显色15 min.对建立的间接ELISA方法的特异性、敏感性、重复性进行分析,结果显示包被抗原与PRRSV、PRV、FMDV、PEDV等阳性血清均无交叉反应,仅可特异性检测LI抗体;当LI阳性血清稀释倍数为1∶400时仍为阳性,表明该方法敏感性较好;批内、批间重复性试验变异系数均小于10%.与国外商品化ELISA检测试剂盒对比,二者的符合率达94.44%;利用所建立的间接ELISA方法对江苏部分地区319份临床猪血清样品进行检测,其中LI阳性检出率为87.77%,表明LI在江苏猪群中普遍存在.本研究首次建立了检测LI的间接ELISA方法,为临床LI血清流行病学调查提供了可行技术手段.

分类号： S852.61

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