产杀菌蛋白菌株A35的基因库构建及细菌强启动子活性片段的克隆

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵立平

作者： 赵立平;梁宏;黄静;杜建中;杨宝茹;王卉;刘少翔;张建华;郑继法

作者机构：

关键词： 青枯假单胞菌;软腐欧氏杆菌;细菌素;基因文库;启动子

期刊名称： 山西农业科学

ISSN： 1002-2481

年卷期： 1993 年 01 期

页码： 2-7

收录情况： 北大核心

摘要： 青枯假单胞菌无致病力突变株 A35可产生对蛋白酶 K 处理及热处理敏感的蛋白类杀菌物质——细菌素,制成活菌制剂用于种子、根系处理,有一定的防病效果。作为分离杀菌基因的基础,用载体 pLAFR3构建了 A35的基因文库,得到1138个克隆,插入片段的平均长度22.63kb,有99%的概率保证每个基因至少在库内出现1次。从库中得到1个在28℃下大量产生胞外多糖的克隆。作为提高拮抗基因表达强度的基础,用启动子探针质粒 pIJ3100克隆软腐欧氏杆菌的基因调控区,得到6400个克隆的启动子片段文库,通过三亲交配法转移到软腐菌中得到2300个接合子,通过筛选,得到4个抗560μg/ml 氯霉素的克隆。酶切分析表明,重组质粒均有外源 DNA 片段的插入,其中pSLB1的插入片段长度约1.65kb,左端为 BamHⅠ和 EcoRⅠ切点,右端是 HindⅢ切点。对该片段的亚克隆正在进行,以便用于构建高强度表达的杀菌基因。

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