H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 胡涛

作者： 胡涛;滕巧泱;申伟霞;张月娥;李国新;李雪松;闫丽萍;姜秀云;李泽君

作者机构：

关键词： H9N2;禽流感病毒;定量PCR;敏感性

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2013 年 002 期

页码： 7-13

摘要： H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是我国主要流行的低致病性禽流感病毒亚型,因而对其进行病毒的监测与诊断显得极其重要.通过比对GenBank上H9亚型禽流感病毒HA基因序列,设计了一个特异性针对H9 AIV HA的探针.特异性和扩增曲线实验结果显示,该探针具有较好的扩增效率,且仅特异性识别H9亚型AIV.通过重组质粒pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板,进行荧光定量PCR.实验结果表明,本研究所建立的荧光定量PCR方法敏感性能达到100个DNA拷贝数,比传统PCR方法检测敏感性提高了1000倍.此外,本方法还能检测到10EID50个病毒,比传统PCR方法检测敏感性也提高了1000倍.通过批间和批内试验,结果表明,这两个试验的变异系数分别小于5%和1%,说明本研究的方法具有较好的重复性.此外,通过检测人工感染动物咽拭子,结果表明H9亚型AIV荧光定量PCR方法比传统PCR的方法检测敏感性提高了100倍.在临床样品的检测中,H9亚型AIV荧光定量PCR方法检测的阳性率比传统PCR法检测的阳性率提高了大约30%.综上所述,本研究所建立的H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确性和敏感性,对H9亚型禽流感疫情防控及其流行病学调查具有积极的科学意义.

分类号： S855.3

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