东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 贾人初

作者： 贾人初;孙毅;刘金明;苑纯秀;傅志强;石耀军;陆珂;孙焕;李浩;蔡幼民;林矫矫

作者机构：

关键词： 日本血吸虫;T7噬菌体展示cDNA文库;东方田鼠;肺脏

期刊名称： 中国血吸虫病防治杂志

ISSN： 1005-6661

年卷期： 2007 年 04 期

页码： 252-256

摘要： 目的构建东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫感染抗性相关基因奠定基础。方法用TRIzol试剂提取东方田鼠肺脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ接头并用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ消化,使其两端分别带EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ黏性末端。用Mini Column纯化,收集300bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoR和Hind末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库。结果经测定,库容量为1.5×106pfu,扩增后文库滴度为1.1×1012pfu/ml。对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91%,阳性克隆片段长度分布在200~1500bp,其中有90%的插入片段>300bp。结论成功构建了东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库。

分类号： R383.24

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